[发明专利]一种花椒原生质体培养再生植株的方法及专用原生质体培养基

说明书

本发明公开了一种花椒原生质体培养再生植株的方法，将来源于花椒无菌试管苗叶片的原生质体悬浮于原生质体培养基中，调整密度后经液体浅层静置培养形成细胞团和小愈伤组织；愈伤组织经增殖培养后，接种到分化培养基上培养分化出不定芽，再转接到生根培养基上培养形成完整植株。本发明对花椒原生质体培养过程中的重要环节进行了深入的研究，尤其是摸索出了专用的原生质体培养基，大大提高了原生质体的细胞分裂频率以及细胞团形成频率。本发明成功获得了原生质体再生植株，初步建立了完整的花椒原生质体再生体系，对开展花椒体细胞杂交育种、原生质体遗传转化等相关生物技术研究具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种花椒原生质体培养再生植株的方法及专用原生质体培养基，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

花椒（Zanthoxylunm bungeanum Maxim.）又名秦椒、蜀椒、蔓椒，是芸香科（Rutaceae）花椒属（Zanthoxylum）植物，分布于亚洲、美洲、非洲以及大洋洲的热带和亚热带地区，在全球约有250种，我国有39种14变种，属多年生落叶灌木或小乔木。花椒是我国的原生植物，具有悠久的栽培历史，分布十分广泛，除东北、内蒙古、西藏、新疆等少数地区外，其他省区均有栽植，为我国重要的经济树种。花椒最主要的用途是作为香辛料，多用于食品的烹巧加工调味，具有赋香、增加食欲、掩盖异味以及防腐等作用。花椒还有独特的药用价值。花椒性味辛、热，小毒，《中国药典》记载花椒具有温中止痛，杀虫止痒的功效，用于治疗脘腹冷痛，呕吐泄泻，虫积腹，蛔虫症，湿疹瘙痒等。花椒中活性成分丰富，主要包括挥发油、麻味成分物质、生物碱、黄酮类物质，具有抑菌，抗炎，提高免疫力等作用。花椒还具有早实、速生、耐干旱、易栽培、适应性强、好管理等特点，花椒根系非常发达，固土能力强，因此可作为绿化和水土保持作用的生态树种。

我国具有丰富的花椒种质资源，栽培面积和产量均居世界第一，但在花椒育种研究方面比较滞后，且仍有一部分资源处于野生或散生状态。随着花椒种植规模的扩大和花椒产业的发展，传统的花椒品种已不能满足当前发展的需要。植物育种常见的方法有选择育种、杂交育种、诱变育种、倍性育种以及基于生物技术的细胞工程育种与分子育种等。花椒为单性结实，属于无融合生殖，不易进行杂交育种，因此花椒的育种工作集中在选择育种方面，缺点是遗传改良主要依靠自然变异，变异率低，新材料选育的时间太长，育种效果不佳，所以花椒种质创新和良种繁育工作一直没有取得突破性进展。

植物原生质体是植物细胞去掉细胞壁后得到的裸露的、具有生命活性的细胞。它可以通过连续的细胞分裂再生成完整植株，即具有细胞全能性；能够摄入如DNA、质粒、病毒、细菌、细胞器等外源物质，是植物遗传转化的良好材料；还可以通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，为实现远缘杂交及克服有性杂交不亲和障碍，及培育植物新品种提供了可能。因此，原生质体培养在植物快速繁殖、植物远缘遗传重组、转基因以及品种改良和创造新类型等方面具有广阔的应用前景，也为花椒育种开辟了新途径。