[发明专利]以酸性蛋白酶为主的酶制剂的制备及其菌株和应用

权利要求书

1.一种以酸性蛋白酶为主的酶制剂的制备方法，其特征在于，

所采用的菌株为黑曲霉（Aspergillus niger）BAK200389，保藏号CGMCC No.19613；

培养黑曲霉（Aspergillus niger）BAK200389得到以酸性蛋白酶为主，果胶酶、木聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、葡聚糖苷酶、葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶、阿魏酸酯酶、羧肽酶、磷酸酶多种伴生酶为辅的富含天然复杂酶类的多酶系酸性蛋白酶制剂。

2.根据权利要求1所述的一种以酸性蛋白酶为主的酶制剂的制备方法，其特征在于，所述酶制剂的制备包括：一级斜面培养、二级液体种子制备、三级液体种子制备、扩大培养一级固体培养。

3.根据权利要求2所述的一种以酸性蛋白酶为主的酶制剂的制备方法，其特征在于，（1）一级斜面培养

将菌种黑曲霉（Aspergillus niger）BAK200389 接种至土豆汁葡萄糖斜面培养基上，28℃～31℃培养5～7 d，得到萌发孢子的斜面；

（2）二级液体种子制备

取步骤（1）中斜面上的孢子菌丝混合物，接种至摇瓶中的液态培养基，摇床震荡培养；瓶内种子菌液呈粘稠状后终止培养，冷藏保存；

（3）三级液体种子制备

将步骤（2）中培养好的摇瓶打开，取液态种子接种至三级摇瓶中的液态培养基，摇床震荡培养；

（4）扩大培养

发酵罐内注入液态培养基，进行高压蒸汽灭菌60 ~ 80 min；停止灭菌后温度降至20 ~35℃并保持；取步骤（3）中已培养好的液态种子，通过灭菌发酵罐口快速倒入发酵罐中，通无菌空气，搅拌培养；

（5）固体培养基的接种培养

将步骤（4）中培养好的液态培养基按5%～15%的重量比放入固体发酵培养基中，将固体发酵培养基混合均匀后，静置发酵培养；相对湿度80 ~ 90 %，料温28℃～35℃，发酵周期3～5 d；

固体发酵培养基按下述比例配制：麸皮85 ~ 95%，豆粕粉5 ~ 15%，硫酸铵0.5~1. 5%，初始水分40 ~ 55%，pH自然。

4.根据权利要求3所述的一种以酸性蛋白酶为主的酶制剂的制备方法，其特征在于，所述液态培养基按下述重量比例配制（%）：麦芽糊精 4.0～8.0%，葡萄糖 2.0 ~ 3.5%，蛋白胨0.5 ~ 2.0%，细麸皮 1.0 ~ 3.0%， pH自然；

所述摇床震荡培养条件：28℃～30℃，转速180~220 r，培养周期1～3 d；所述的固体发酵培养基的灭菌要求：121℃，0.1MPa，40~60 min；所述的冷藏保存的条件：4℃，5 ~ 8 d；

所述发酵罐培养的要求：27℃～32℃，搅拌转速150 ~ 200 r，培养周期1～3 d；所述发酵罐的灭菌要求：121℃，0.1MPa，60~80 min；

所述发酵罐罐口的灭菌要求：接种操作前酒精火圈灼烧3 ~ 5 min，接种期间保持火不灭，接种完毕后关闭罐口，火圈撤离并熄灭。

5.根据权利要求3所述的一种以酸性蛋白酶为主的酶制剂的制备方法，其特征在于，还包括发酵产物的烘干步骤和粉碎步骤；其中，烘干至含水量5~15%停止。

6.一种黑曲霉（Aspergillus niger），命名为黑曲霉BAK200389，其保藏号为CGMCCNo.19613。

7.一种畜禽饲料，其特征在于，包括权利要求1所述黑曲霉BAK200389的培养产物。