[发明专利]适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒

说明书

本发明提供一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒，提取试剂盒含有裂解结合液、磁珠溶液、消化酶、核酸释放剂、洗涤液、缓冲液。与常规的病毒核酸提取方法相比较，本方法操作步骤简单、安全，一次性加入裂解结合液和磁珠等组分，实现了裂解和结合同时进行，可以达到DNA和RNA共提；根据后续实验需要，可选择性保留DNA和/或RNA，且抑制物质残留少。试剂盒可采用预分装方式，结合核酸自动提取仪使用，整个流程下来仅需40min左右；无氯仿苯酚等有毒试剂。

技术领域

本发明涉及核酸提取领域，特别涉及一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒。

背景技术

随着分子生物学技术的兴起与发展，基因组学和蛋白组学逐渐成为研究的热点。基因组水平的研究对于遗传发育、流行病检测、病理变化、生理变化、微生物鉴别诊断等多领域都有着重要影响。基因测序和分子诊断作为分子生物学的重要应用分支，与传统疾病诊断方法相比有着不可替代的优势，合理的样本保存和提取是研究的重要基础保障，对后续的检测分析有重要影响。

血液是人体重要的体液组成部分，与人的生理和病理变化密切相关，常被用来进行相关疾病的诊断。随着分子生物学在分子诊断领域的广泛应用，血液除用于血常规检测外，正逐渐用于疾病的预测和遗传学分析。作为研究的基础，稳定的核酸提取对于基因组学研究是十分重要的。传统的血液提取核酸的方法有很多种类型，如酚氯仿抽提法、盐酸胍裂解过柱法、氯化钠沉淀法等。

比如中国专利CN 106906207A公开了一种核酸提取试剂方法，利用Gu-HCl、Tris-HCl、EDTA、异丙醇、SDS、Triton-100、β-巯基乙醇和柠檬酸钠进行裂解吸附，LiCl、NaCl、MOPS、乙醇等进行洗脱；中国专利申请CN 106867992A公开了一种全血DNA提取方法，裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸三钠、Tween 20，洗涤液包括异硫氰酸胍、Tris-HCl、NaCl和无水乙醇，此类方法需要依靠高浓度的胍盐进行裂解，低温时容易结晶，还需要异丙醇、无水乙醇等试剂配合使用，操作程序复杂繁琐。

中国专利CN 104611324A公开了一种全血样本快速裂解试剂盒及其检测方法，裂解液由月桂酰基肌氨酸钠、二硫苏糖醇、TE组成，高温裂解后高速离心用于核酸检测。此方法快速简便，但由于血液成分复杂，粗提取方法会影响到核酸提取纯度和产量，对低浓度的样本的应用效果也较差，也难以后续长时间保存核酸。

中国专利申请CN104560959A公开了一种饱和氯化钠法快速批量提取血液DNA的试剂盒及方法，该方法以氯化钠为蛋白沉淀液，需要冷冻和高温等多个步骤，操作复杂，耗时长，且产物难以干净去除盐离子。

换言之，目前虽然有各式各样的核酸提取方法，但均存在着或多或少的技术缺陷亟待解决。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法及试剂盒，无需高浓度胍盐，通过裂解液和核酸释放剂来释放核酸，操作简单；可以采用不同的清洗步骤来获取DNA和RNA；通过与磁珠结合，实现快速高效全血核酸提取，且试剂盒中的提取试剂预分装于深孔板，配合核酸提取仪使用即可可实现全自动核酸提取，使用时只需加入适量样本，放入仪器即可自动完成核酸的提取纯化。

本发明的目的在于提供一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取试剂盒，该试剂盒与市面现有试剂盒相比组分简单，试剂毒性小、污染小，核酸提取效率高，无需复杂操作即可获取DNA、RNA核酸。

本发明的目的在于提供一种适用于全血、血清或血浆的磁珠法核酸提取方法，该磁珠法全血提取方法操作步骤简单、安全，一次性加入裂解结合液和磁珠等组分，实现了裂解和结合同时进行，可以达到DNA和RNA共提；根据后续实验需要，可选择性保留DNA和/或RNA，且抑制物质残留少。试剂盒可采用预分装方式，结合核酸自动提取仪使用，整个流程下来仅需40min左右；无氯仿苯酚等有毒试剂。