[发明专利]利用乙炔还原法改良的固氮酶活性测定装置及其测定方法

权利要求书

1.利用乙炔还原法改良的固氮酶活性测定装置，其特征在于，包括密封反应瓶(7)，所述的密封反应瓶(7)瓶口设有异丁基胶塞(6)，异丁基胶塞(6)上固定有气体进样管(4)和营养液进样管(9)，所述的气体进样管(4)上依次连接第一阀门(5)、第二阀门(3)，气体进样管(4)另一端通过橡胶塞(2)与注射器(1)连通；

所述的营养液进样管(9)上依次设有第三阀门(10)、多接管阀(11)；多接管阀(11)连接营养液瓶(12)；

所述的密封反应瓶(7)位于多孔保温式震荡塑料组件(8)内。

2.一种利用乙炔还原法改良的固氮酶活性测定方法，其特征在于，采用权利要求1所述的利用乙炔还原法改良的固氮酶活性测定装置，包括以下步骤：

A)取新鲜土壤或植物根瘤，装入密封反应瓶(7)中；

B)盖上带有营养液进样管(9)和气体进样管(4)的异丁基胶塞(6)；

C)通过营养液进样管(9)向密封反应瓶(7)加入葡萄糖营养液，关闭第三阀门(10)；

D)将注射器(1)连接橡胶塞(2)，打开第二阀门(3)、保持第一阀门(5)关闭，抽吸气体进样管(4)内空气至管干瘪；

E)关闭第二阀门(3)，取下注射器(1)排出管内空气，再次连接橡胶塞(2)；

F)同时打开第一阀门(5)、第二阀门(3)，抽吸一定体积空气后关闭第一阀门(5)、第二阀门(3)，取下注射器(1)排出管内空气；

G)使用注射器(1)抽吸一定体积纯度为99.9％的乙炔气体，连接橡胶塞(2)，依次打开阀门第二阀门(3)、第一阀门(5)，将气体注入密封反应瓶(7)后，迅速关闭阀门第二阀门(3)、第一阀门(5)；

H)将密封反应瓶(7)放于多孔保温式震荡塑料组件(8)中，于28℃恒温震荡培养箱培养24小时；

I)打开第二阀门(3)，使用注射器(1)抽吸以排出气体进样管(4)内空气，再次连接橡胶塞(2)，打开第一阀门(5)抽吸反应气体用于测定；

J)采用气相色谱仪测定乙烯的产生量；根据结果中测得的乙烯含量，用方程(1)计算土壤固氮活性：

其中：ARA：固氮酶活性，以单位土壤在单位时间内产生的乙烯摩尔量指代；K为乙烯摩尔量，μmol；m_soil为湿润土壤的体积，g；h_reaction为培养时间，d；为乙烯样品的体积，ml；atoms表示实验环境气压对应高度的水银柱产生的压力，mm,Hg，是常用的压力单位；760mmHg是一个常用的压力值，即一个标准大气压；t：实验环境温度，℃。