[发明专利]TSAB人源单克隆抗体重组载体、重组抗体及其制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种甲状腺疾病Graves’病分型抗体TSAB人源单克隆抗体重组载体、重组抗体及其制备方法。针对TSAB抗体稳定性差、产量低等缺陷，本发明提供了一种重组TSAB人源单克隆抗体重组载体、重组抗体及其制备方法。本发明重组抗体制备时采用了CHO表达系统，构建稳定表达的细胞株，稳定表达量≥870mg/L，同时该抗体活性高，完全满足科研和检测的需求，实现该分型抗体的国产化，有助于提高疾病检出率，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种甲状腺疾病Graves’病分型抗体 TSAB人源单克隆抗体重组载体、重组抗体及其制备方法。

背景技术

自身免疫性甲状腺疾病(Autoimmune thyroid disorders，AITD)是机体对甲状腺组织发生自身免疫反应所导致的一组自身免疫性疾病。它主要由两个病组成：Graves’病(Graves’disease，GD)和桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis， HT)。AITD共同的特点是患者血清中存在针对甲状腺组织的多种自身抗体，其中包括促甲状腺素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)等。在HT患者中，TGAb 的流行率为25-50％，TPOAb流行率为90％，TRAb分类中的一种-TBAb(TSHR blocking autoantibodies)流行率为17％。GD患者血清中，TRAb在90％以上均升高，理论上，TRAb应该为100％阳性，才符合TRAb是GD的主要致病因素这一理论。但实际上，由于受到检测方法灵敏性的影响，TRAb无法达到100％阳性。TRAb是一组异质性抗体，可进一步分类为甲状腺刺激抗体(TSAb)、甲状腺阻断抗体(TBAb)和中性抗体，取决于它们各自对于TSHR所发挥的作用。这些抗体的产生是由于免疫系统失去对甲状腺抗原的耐受所致，目前认为这一失去耐受机制是多因素作用的结果，包括遗传易感性和环境因素等。TSHR抗体的确切结合位点被描述为TSHR亚基富含亮氨酸的区域。这也是甲状腺刺激激素(TSH) 结合的部位。TRAb的刺激性类型导致与TSH和TSHR结合的下游效应相同，包括腺苷酸环化酶的激活导致环状腺苷单磷酸生成(AMP)，促进成纤维细胞透明质酸合成及下游信号通路的活化。

目前，市面上还没有TSAB分型抗体检测试剂盒，同时很多学者都在积极研究TSAB抗体对Graves’病的作用及其作用机制，但分型抗体TSAB的稳定性差，产量低，需从国外购买，成本较高也极为不便利，这严重阻碍了TSAB抗体对 Graves’病的作用相关方面的研究，影响技术进步。

发明内容

针对上述TSAB抗体稳定性差、产量低等缺陷，本发明提供了一种重组TSAB 人源单克隆抗体重组载体、重组抗体及其制备方法，可实现抗体的量产，有助于提高该疾病的诊出率。

本发明提供了一种TSAB人源单克隆抗体的重组载体，其包含表达TSAB 人源单克隆抗体的表达框架，将所述表达框架插入表达载体中构建而成。

其中，上述TSAB人源单克隆抗体的重组载体中，所述的TSAB人源单克隆抗体包括一条重链VH和一条轻链VL。

进一步的，所述重链VH的编码核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述轻链VL的编码核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

SEQ ID NO:1重链VH的编码核苷酸序列