[发明专利]一种酱牛肉中杂环胺的检测方法

权利要求书

1.一种酱牛肉中杂环胺的检测方法，其特征在于：

步骤一、将搅碎的酱牛肉肉样与乙酸乙酯和1mol/L的NaOH溶液混合，涡旋3-5min后在离心机中离心5-7min，收集上清液，剩余残渣通过上述步骤重复提取两次，收集上清液，并将三次收集的上清液合并；

步骤二、上清液静置分层后，除去位于底部的水溶液，将上层的乙酸乙酯萃取液在氮气下吹干得到提取物；

步骤三、使用二氯甲烷重新溶解提取物，将溶解液加入预先用二氯甲烷洗脱的PRS柱中，依次用0.1M HCL溶液、体积比为1:1的甲醇/0.1M HCL溶液、蒸馏水洗脱PRS柱，收集非极性HAs，洗脱液用氨水中和后，加入到C18固相萃取柱中；再用0.5M乙酸铵洗脱PRS柱，收集极性HAs，洗脱液加入到另一C18固相萃取柱中；

步骤四、分别用1mL体积比为9：1的甲醇/氨水冲洗两个C18柱后，将洗脱液合并后过0.22μm滤膜后收集待测样品溶液；

步骤五、采用API 4000高效液相色谱串联三重四极杆质谱联用仪对待测样品溶液进行杂环胺定性定量检测，液相色谱使用Agilent SB-C18色谱柱，流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为乙腈，流速为0.2μL/min，进样量为10μL；质谱检测在MRM模式下进行。

2.根据权利要求1所述的一种酱牛肉中杂环胺的检测方法，其特征在于：步骤一中，每一次提取的过程中，乙酸乙酯的体积与肉样质量比为5:1，NaOH溶液的体积与肉样质量比为1:1，乙酸乙酯和NaOH溶液的体积单位为mL，肉样质量单位为g；离心机的转数为5000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种酱牛肉中杂环胺的检测方法，其特征在于：步骤三中，重新溶解提取物的过程中，分3次溶解，每次添加二氯甲烷的体积与肉样质量比为1:1；洗脱PRS柱的过程中，HCL溶液的体积与肉样质量比为2:1，甲醇/HCL溶液的体积与肉样质量比为3:1，蒸馏水的体积与肉样质量比为1:1，乙酸铵溶液的体积与肉样质量比为10:1；其中，二氯甲烷、HCL溶液、甲醇/HCL溶液、蒸馏水、乙酸铵溶液的体积单位为mL，肉样质量单位为g。

4.根据权利要求1所述的一种酱牛肉中杂环胺的检测方法，其特征在于：步骤五中，Agilent SB-C18色谱柱规格为3.5μm，2.1mm×50mm；液相色谱流动相梯度程序为0-2min，20％B；2-7min，45％B；7-13min，70％B；13-14min，70％B；14-18min，20％B；18-18.1min，5％B。

5.根据权利要求1所述的一种酱牛肉中杂环胺的检测方法，其特征在于：步骤五中，MRM模式的操作条件如下:电喷雾电压IS：5500.0V；离子源温度TEM：500℃；雾化气压力GS1：50.00Psi；辅助气压力GS2：50.00Psi；气帘气压力CUR：35.00Psi。

6.根据权利要求1所述的一种酱牛肉中杂环胺的检测方法，其特征在于：步骤五高效液相色谱串联三重四极杆质谱联用仪检测后，数据使用Analyst软件进行分析。