[发明专利]一种基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法

权利要求书

1.一种基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，在枯草芽孢杆菌批培养发酵中，在线检测尾气中的OUR的变化趋势，在OUR下降的时间点进行流加补料，使OUR呈现平稳或者缓慢下降的状态，继续发酵合成α-淀粉酶；所述补料为葡萄糖或全培养基。

2.根据权利要求1所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，所述全培养基包括：玉米淀粉210.67g/L、豆粕50g/L、棉粕53.33g/L、氯化钙1.33g/L、氯化铵3.07g/L、玉米浆20g/L、磷酸氢二钠11.07g/L、高温淀粉酶0.01mL/100mL。

3.根据权利要求1或2所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，在所述枯草芽孢杆菌批培养发酵中，包括如下步骤：

批培养发酵：发酵罐中装有发酵罐培养基，调节温度至34℃后接种枯草芽孢杆菌，接种量为10％，进行发酵，发酵过程中控制pH为6.2～6.8、溶氧40％以上；

流加补料发酵：待上述批培养发酵尾气中的OUR出现下降时，按总糖量流加全培养基或按还原糖流加葡萄糖，使OUR保持平稳不再下降，后发酵至发酵结束。

4.根据权利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，所述补料的流加速率与所述批培养发酵过程中稳定期的耗糖量相同。

5.根据权利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，批培养发酵：发酵罐中装有发酵罐培养基，装液量为3/5，调节温度至34℃后接种枯草芽孢杆菌，接种量为10％，在搅拌转速300epm rpm、通气量为6L/min、罐压0.05Kpa的条件下标定溶氧150％，进行发酵，发酵过程中控制pH为6.2～6.8、溶氧40％以上。

6.根据权利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，在所述批培养发酵前，用饱和亚硫酸钠溶液标定溶氧电极至0％。

7.根据权利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，所述发酵罐培养基包括：玉米淀粉158g/L、豆粕37.5g/L、棉粕40g/L、氯化钙1g/L、氯化铵2.3g/L、玉米浆17.25g/L、磷酸氢二钠8.3g/L、高温淀粉酶0.01mL/100mL。

8.根据权利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，流加补料后发酵pH值回升至7.3～7.7为发酵结束。

9.根据权利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，所述接种的枯草芽孢杆菌经过种子摇瓶培养得到，步骤如下：取甘油管中菌液接种至种子摇瓶培养基中，接种量为0.6％，在温度34℃、转速220r/min的条件下摇瓶发酵，培养24h。

10.根据权利要求9所述的基于OUR的枯草芽孢杆菌产中温α-淀粉酶的流加发酵方法，其特征在于，所述种子摇瓶培养基包括：玉米淀粉47.4g/L、豆粕11.25g/L、棉粕12g/L、氯化钙0.5g/L、氯化铵1.15g/L、玉米浆4.5g/L、磷酸氢二钠3g/L、高温淀粉酶0.01mL/100mL和卡那霉素25ug/mL。