[发明专利]与血脑屏障破坏程度相关的血清外泌体miR-410-3p的应用及其检测方法

说明书

本发明提供一种与脑缺血后血脑屏障破坏程度相关的血清外泌体miR‑410‑3p，所述血清外泌体miR‑410‑3p的序列为AATATAACACAGATGGCCTGT。血清外泌体miR‑410‑3p可用于评估脑缺血后血脑屏障破坏程度的生物标志物。本发明提供的血清外泌体miR‑410‑3p表达水平的检测方法包括如下步骤：（1）建立小鼠大脑中动脉栓塞模型，缺血再灌注，并收集血清；（2）分离血清中的外泌体；（3）实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测脑缺血再灌注损伤和恢复不同阶段的血清外泌体中miR‑410‑3p的表达水平。本发明的技术方案证实了血清外泌体中miR‑410‑3p的表达的趋势与BBB损伤和修复过程基本一致，血清外泌体miR‑410‑3p可作为一种评判脑缺血性损伤的生物标志物。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种与脑缺血后血脑屏障破坏程度相关的血清外泌体miR-410-3p的应用及其表达水平的检测方法。

背景技术

2016年的全球疾病负担(Global Burden of Disease，GBD)数据显示脑卒中是全球范围内导致死亡和残疾的第二原因，其中又以东亚的发病率最高(Gorelick,2019)。随着我国人口平均寿命延长和社会的老龄化，过去30年里我国脑卒中疾病负担有爆发式增长的态势，40岁以上脑卒中现患病人数已超过1200万(中国脑卒中防治报告2018)。脑卒中给个人带来巨大的身心痛苦，给家庭及社会造成沉重的经济负担。目前临床治疗卒中的有效方法是静脉溶栓及机械取栓，但由于治疗时间窗狭窄且诸多因素限制了其使用，仅小部分(3.4％-5.2％)患者能得到有效救治(Donnan,Fisher,Macleod,Davis,2008)。

血脑屏障(blood-brainbarrier,BBB)是外周循环和中枢神经系统(CNS)之间的一个受到严格调节的界面，通过调节血液和脑组织之间的离子、氧气和营养物质的流入和流出,限制毒素和病原体入侵,保护脆弱的神经组织,维持大脑微环境稳态,保证神经系统功能正常发挥(Pardridge,2003)。脑卒中发生后，血脑屏障的通透性增加、完整性被破坏，大量血液成分进入缺血组织，进而引起炎症和水肿。急性卒中患者血脑屏障破坏程度与患者的预后密切相关(Jiang et al.,2018)，同时也与急性血管内治疗后颅内出血(ICH)的风险和严重程度呈正相关(Ren ú et al.,2015)。

目前BBB完整性检测的方法主要有两类：体外的检测方法和在体的影像学方法(Domi,Honarvar,Kassner,2019)。常用的体外检测方法包括：伊文氏蓝(Evans blue，EB)半定量分析、免疫组织化学法和电子显微镜检查法。EB染色是最为常用的一种评价BBB完整性的半定量方法。但该方法的操作过程繁琐，易受人为因素的干扰。通过检测血液中血清白蛋白和免疫球蛋白IgG的免疫组织化学法也可以半定量评价BBB的通透性，同时还能进行形态学观察。电子显微镜则可以观察到BBB超微结构的改变，被认为是检测BBB破坏的“金标准”，但电子显微镜检测存在不能提供定量分析，费时、费力、灵敏度较差等缺点。上述这3种检测方法都要牺牲实验动物，无法进行连续动态研究。

临床评估脑卒中患者BBB完整性的体外检测方法主要是基于脑脊液和血液的生化指标。由于BBB的存在，血和脑脊液中许多物质的含量有极大的区别，BBB受到破坏时，脑脊液或血液中物质含量发生变化，其幅度与BBB破坏的程度相关。因此，可通过检测这些物质在体液中的含量来评价BBB的功能和通透性。但此类方法较为间接，且此类指标的灵敏度各不相同。常见的方法有：1、脑脊液/血清白蛋白比值(BBB指数＝脑脊液蛋白/血清白蛋白)是评估血脑屏障通透性的一种常见且成熟的方法，但它具有侵入性(需要做穿刺)；此外，由于受脑脊液流量的影响较大，因此不能可靠地反映血脑屏障通透性。2、髓鞘碱性蛋白，通过测定血液中髓鞘碱性蛋白来评价BBB破坏程度。