[发明专利]气相色谱-质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法

权利要求书

1.气相色谱-质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法，其特征在于，所述方法为：

S1:样品脂类提取：准确称取2.0g均质粉碎的样品于三角瓶中，加入2μg19-羟基胆固醇作为内标物，加入150ml体积比为2：1的三氯甲烷、甲醇为提取剂，充分震荡2min，然后超声30min；置于4℃环境中过夜，静置分层，再用滤纸过滤，获得滤液，氮气吹干，得到脂类提取物；

S2:皂化：向得到的脂类提取物中加入10mL浓度为1mol/L的KOH溶液，10mL甲醇，充分震荡，超声5min，使脂类提取物混合溶解，室温下静置皂化10h，然后用10mL去离子水转移至分液漏斗中，再用10mL乙酸乙酯重复萃取3次，移取上层溶液，再用10mL去离子水冲洗萃取液；然后，经无水硫酸钠脱水在滤纸上过滤，除去水分；再用10mL乙酸乙酯冲洗一遍，获得滤液，旋转蒸发仪上浓缩至近干；

S3:净化浓缩：向得到的皂化后的提取物中加入3mL正己烷，充分震荡溶解，然后缓慢加入到已活化的NH₂-SPE中，依次用10mL体积比为95:5的正己烷、乙酸乙酯，和10mL体积比为90:10的正己烷、乙酸乙酯洗柱，弃掉废液，最后用5mL丙酮洗柱，收集滤液，氮气吹干；

S4:衍生化：加入100μL的N,O-双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺BSTFA，60℃下，衍生40min，衍生结束之后，用氮气吹干，用1.0mL正己烷溶解定容，上机测试；

S5:取浓度为0.2μg/mL的9种胆固醇氧化物混合标准溶液，在气相色谱条件和质谱条件下分别对其进行检测，以9种胆固醇氧化物的定量离子峰面积与19-羟基胆固醇的定量离子峰面积的比值为纵坐标，以9种胆固醇氧化物工作液浓度19-羟基胆固醇的浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线，标准曲线的线性回归方程如表1所示：

表1

式中x为对应胆固醇氧化物的浓度，单位μg/mL，y为峰面积，R²为相关系数；

S6:样品前处理之后在气相色谱条件和质谱条件下进行检测，按照以下公式(1)计算样品中9种胆固醇氧化物的含量；

X＝ρ×V/m (1)；

式中：X为样品中胆固醇氧化物的含量，单位为mg/kg；ρ为从线性回归方程中得到的胆固醇氧化物浓度，单位为μg/mL；V为样品定容体积，单位为mL；M为样品质量，单位为g；

所述气相色谱条件为：

色谱柱：DB-5ms 30m×0.25mm×0.25μm；柱温升温程序：初始温度150℃保持2min，以20℃/min升温至300℃，保持20min；进样口温度：280℃；进样模式：不分流；进样量：1.0μL；载气：氦气；

所述质谱条件为：

离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：250℃；电离方式：电子轰击离子源；电子能量：70eV；电子倍增器电压：1632V；采集模式：选择离子扫描模式；扫描质量范围：m/z 50～550；溶剂延迟：8min。