[发明专利]一种适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法

权利要求书

1.一种适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：去顶端优势

野外采集生长旺盛的沉水植物植株，去除顶芽在室内培养5-10d，添加营养液，以破除顶端优势，促进居间分生组织生长及侧芽萌发；

于肥皂水中浸泡2h以上，去除叶和根，用自来水冲洗1h，取距顶端2-50cm的茎段，用蒸馏水冲洗2-3遍；

步骤二：外植体切取

在距顶端2-50cm的茎段中，取带节茎段，节上端保留茎段5-15mm，节下保留茎段10-25mm，茎段总长度在15-35mm之间；

或取带芽茎段，芽上端保留茎段5-15mm，芽下保留茎段15-25mm，茎段总长度在15-35mm之间；

或取根状茎的茎节，节上下端各保留茎段5-25mm，茎段总长度在15-35mm之间；

步骤三：外植体消毒，进行茎段的消毒灭菌；

步骤四：激活侧生分生组织

取消毒灭菌后的外植体茎段，接种到激活培养液中，置于组培室中培养；

经培养后，侧生分生组织被激活，茎节伸长，并分化出侧芽，过长的茎段再以每段1~4cm长度切分，接种到扩增培养液中；定期重复此操作，以获得足量的侧生分生组织；

步骤五：完整苗的诱导

于超净工作室中，取扩增培养后的带芽茎段或带节间茎段接种到生根培养基表面，生根培养基厚度在2~4cm，上面覆盖2~5cm扩增培养液，于固液双相培养基中培养，得到完整苗；

步骤六：壮苗

将完整苗取出，去除培养基，用自来水冲洗后，移栽到装有灭菌沙的可降解的无纺布收口袋中，再放入大型容器内，保持水深50cm以上，每周换水并添加1/20~1/10营养液，于壮苗温室中培养直至植株长至20cm以上，成为工程苗；

步骤七：工程苗包装

选择符合标准的工程苗连袋取出，拉出无纺布收口袋的抽绳而收紧开口，装入包装箱，包装箱中加入自来水没过工程苗及冰袋，保持温度在10℃-25℃，密封包装箱。

2.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述外植体消毒的步骤包括，在超净工作室中，将茎段用肥皂水或洗洁精浸泡1～2h，70%酒精浸泡15-40s，无菌水冲洗三遍，再用5%植物组培抗菌剂PPM浸泡5-8min，或用0.2％HgCl₂浸泡20-40min，或用1.05% NaClO+1滴/100ml TWEEN-80浸泡15-20min，然后用无菌水冲洗三遍，浸泡5min，放在无菌滤纸上将水吸干。

3.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述营养液为Hoagland营养液。

4.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述激活培养液、扩增培养液和生根培养基的配方根据沉水植物的不同种类进行差异化选取。

5.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述激活侧生分生组织步骤中，组培室内的平均光照强度为2000lx，昼夜比10h：14h，室温25℃，培养期14d。

6.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述壮苗温室中的昼夜温度分别不低于25℃和18℃，可直接利用太阳光或补充光照的灯具来模拟日光。

7.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述完整苗为至少生出2根2cm以上的根的苗。

8.根据权利要求1所述的适用于沉水植物快速扩繁的脱毒种苗生产方法，其特征在于，所述无纺布收口袋的高度为20cm，宽度16cm，装沙后直径为9~10cm，收口的抽绳为可降解无纺布制成的1cm宽的细带，装入的无菌沙高度为9~10cm。