[发明专利]一种检测人体干尿滤纸片中多种有机酸的定量检测方法

权利要求书

1.一种检测人体干尿滤纸片中多种有机酸的定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤是：①采用滤纸片收集尿液样本；②对干尿滤纸片进行洗脱处理，测定肌酐含量；③洗脱尿液与内标液混合后通过有机溶剂将目标有机酸萃取纯化，氮气吹干后溶于水中，然后用强阴离子交换柱纯化，有机溶剂洗脱后氮气吹干，溶于水中得到待测样本；④将上述待测样本通过液相色谱和质谱联用检测，同步对多种有机酸进行定性和定量的批量检测。

2.根据权利要求1所述，其特征在于：采集尿液所用滤纸片为裁剪为特定尺寸的滤纸，包括但不限于新华1号，新华3号和Whatman公司903号滤纸。

3.根据权利要求1所述，其特征在于：采集样本为人体晨尿。

4.根据权利要求1所述，其特征在于：干尿片制备方式为将一定量人体新鲜晨尿滴到定量滤纸片上，使尿液分布均匀，滤纸片晾干后密封保存备用。

5.根据权利要求1所述，其特征在于：干尿片洗脱处理所用溶剂包括但不限于水、PBS、生理盐水，优选洗脱溶剂为生理盐水。

6.根据权利要求1-5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤④中液质联用检测的液相色谱条件为：色谱柱为键合相色谱柱，进样量为5-50μL，流动相A为含1-10mmol/L的乙酸铵水溶液+0.1％-1％甲酸的纯水，流动相B为乙腈甲醇的混合溶液，乙腈与甲醇的质量比为9-1:1-9；流动相的流速为0.1-2.0mL/min；流动相的梯度(以体积百分比计)：

0-1min,A:30-100％,B:70-0％；

1.1-5min,A:10-60％,B:90-60％；

5.1-9min,A:0-50％,B:100-50％；

9.1-11min,A:50-100％,B:50-0％；

11.1min,A:30-100％,B:70-0％。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述键合相色谱柱为C18或C8等键合相色谱柱，规格为50-150mm×2.1-4.6mm,1.8-5μm。

8.根据权利要求1-7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中液质联用检测的质谱条件为：采用电喷雾(ESI)离子源，负离子MRM扫描方式，雾化气流速为5-10L/min，气帘气流速为5-20L/min，离子源电压为-2000-4500V，离子源温度为200-400℃。

9.根据权利要求1-8任一项所述的检测方法，其特征在于，所述有机酸化合物包括人体尿液中代谢产生的主要有机酸产物；采用多反应监测的质谱扫描模式，目标物的离子对监测如下：乙二酸(m/z 145.2—83.1)、辛二酸(m/z 173.2—111.2)、乙基丙二酸(m/z131.1—87.1)、乳酸(m/z 89.1—43.1)、丙酮酸(m/z 87.1—43.1)、β-羟基丁酸(m/z103.1—59.1)、柠檬酸(m/z 191.1—87.1)、顺式乌头酸(m/z 173.1—85.1)、异柠檬酸(m/z191.1—73.1)、α-酮戊二酸(m/z 145.1—101.1)、α-酮异戊酸(m/z 115.1—115.1)、α-酮异己酸(m/z 129.2—129.2)、α-酮-β-甲基戊酸(m/z 129.2—129.2)、琥珀酸(m/z 117.1—73.0)、富马酸(m/z 115.1—71.0)、苹果酸(m/z 133.1—115.0)、羟甲基戊二酸(m/z117.1—59.0)、黄尿酸(m/z 204.2—160.1)、β-羟基异戊酸(m/z 117.1—73.1)和甲基丙二酸(m/z 117.1—73.1)；内标：D3-甲基丙二酸(m/z 120.1—73.1)、D3-乙基丙二酸(m/z134.1—87.1)、D4-柠檬酸(m/z 195.1—87.1)。