[发明专利]一种赖脯胰岛素衍生物及其应用

说明书

本发明提供了一种赖脯胰岛素衍生物及其制备方法。具体地，本发明提供了包含绿色荧光蛋白折叠单元和赖脯胰岛素或其活性片段的融合蛋白。本发明的融合蛋白表达量显著提高，融合蛋白中的赖脯胰岛素蛋白折叠正确，具有生物活性。并且，本发明融合蛋白中的绿色荧光蛋白折叠单元可以被蛋白酶消化成小片段，和目的蛋白相比分子量差别大，容易分离。本发明还提供了利用该融合蛋白制备赖脯胰岛素的方法及制备中间体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及一种赖脯胰岛素衍生物及其应用。

背景技术

糖尿病是全球范围内威胁人类健康的一大疾病。在中国，随着人民生活方式的改变和老龄化进程的加快，糖尿病的患病率呈快速上升趋势。糖尿病的急慢性并发症，尤其是慢性并发症累计多个器官，致残、致死率高，严重影响患者的身心健康，并给个人、家庭和社会带来沉重的负担。

赖脯胰岛素为第一个速效人胰岛素的类似物，属于第三代胰岛素，是人胰岛素B链的28位、29位脯氨酸和赖氨酸的顺序换位。这种互换改变了B链末端的空间结构，减少了二聚体内胰岛素单体间的非极性接触和β片层间的相互作用，使胰岛素的自我聚合特性发生改变，易于解离，注射后能较快分解，从而加速皮下注射后的吸收，有利于控制进餐后迅速升高的高血糖。它能很好地模拟人胰岛素的分泌模式，其药代动力学特性是常规人胰岛素的一半左右，其起效时间是10～15分钟，达峰时间为1～1.5小时，作用持续时间缩短至4～6小时，使患者在获得良好的血糖控制的同时不易与餐前或者夜间胰岛素作用发生叠加，显著减少了夜间低血糖的发生率。此外，与人胰岛素相比，它具有安全性高和患者依从性好等优点。

目前，现有技术中的赖脯胰岛素制备工艺较为复杂，产量也不高，影响其进一步地推广和应用。因此，本领域迫切需要开发工艺简单、环境友好、收率高、产量高的赖脯胰岛素的制备及纯化方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种赖脯胰岛素衍生物及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种重组赖脯胰岛素融合蛋白，具有式I所示的结构：

A-FP-TEV-R-G (I)

式中，

“-”代表肽键；

A为无或前导肽，

FP为绿色荧光蛋白折叠单元，

TEV为酶切位点，较佳地为TEV酶酶切位点；

R为用于酶切的精氨酸或赖氨酸；

G为赖脯胰岛素或其活性片段；

其中，所述的绿色荧光蛋白折叠单元包含2-6个，较佳地2-3个选自下组的β-折叠单元：