[发明专利]一种与西瓜叶片颜色相关的CAPS标记及其应用

说明书

本发明公开了一种与西瓜叶片颜色相关的CAPS标记，其扩增所述CAPS标记的引物组包括正向引物和反向引物，正向引物核苷酸序列为5’‑TTACAAAACGCATTTGGCTG‑3’，反向引物核苷酸序列为5’‑AACAAACAGCCACCTCAACC‑3’。本发明不需要经过西瓜苗期鉴定，用种子就可以准确快速的鉴定出西瓜叶色，可以提高育种效率，缩短鉴定时间，且还具有工作量小、生产成本低等优点。利用本发明所述标记进行西瓜育种时，检测方法准确可靠，操作简便，能够更简单检测西瓜叶色，为西瓜品种选育或改良提供了科学依据。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及西瓜叶片颜色的鉴定，具体涉及一种与西瓜叶片颜色相关的CAPS标记。这种CAPS标记可用于西瓜育种，采用西瓜种子即可快速鉴定西瓜叶片颜色。

背景技术

在传统的选择育种中，因为难以确定后代的基因型，选择的依据通常是植物的表现型而不是基因型，选择时间较长，且表现型易受环境因素的影响，导致选择的不准确和效率较低。分子标记辅助育种以与目标形状紧密连锁分子标记为工具对目标性状进行筛选，通过分子标记以基因型进行种质资源的筛选，具有准确、快速、不受环境条件干扰的优点，避免了传统育种过程中性状选择的盲目性，提高了育种效率。CAPS标记是对扩增产物进行酶切分析的一种分子标记，具有高通量、简单、稳定、灵敏度高等特定，是目前分子标记辅助育种工作中极具发展前景的分子标记。

西瓜叶片后绿性状具有新生叶由浅黄—浅黄绿—正常绿的渐变过程，而正常绿植株叶片抽生即变绿，没有这个渐变的过程。因此，后绿与一般正常绿幼苗或植株有明显的区别，最早鉴别期在子叶出土到幼苗1片真叶期间，时间在播种后7-10d。西瓜叶片后绿性状是目前发现的苗期鉴定西瓜杂交种子纯度最理想的标记性状，在苗期即能准确鉴定杂种，具有准确、直观、简便、快速、低耗等优点。但该性状是隐性的，杂交一代不表现。

西瓜是一种重要的园艺作物，我国是世界第一大的西瓜生产和消费大国，然而在西瓜育种过程中，可用的分子标记较少，仍以传统的选择育种为主，效率较低，难以快速获得满足市场需求的新品种。叶色是西瓜重要的农艺性状，与西瓜植株的光合作用能力息息相关，因此急需深入开展西瓜叶色研究，开发可用于西瓜育种的分子标记，以缩短育种进程提高育种效率。

发明内容

为解决上述西瓜育种过程中的技术问题，本发明基于西瓜叶片性状分子水平研究，开发一种可用于西瓜育种的分子标记，以缩短育种进程，提高育种效率。具体地，本发明给出一种与西瓜叶片颜色相关的CAPS标记，利用该CAPS标记能够用种子准确快速的鉴定出西瓜叶色，具有通量大、扩增产物稳定、检测快速的优点，可显著提高西瓜叶色选择育种的效率。

一种与西瓜叶片颜色相关的CAPS标记，其扩增所述CAPS标记的引物组包括正向引物和反向引物。

如本发明说明书的实施例记载，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体为5^，-TTACAAAACGCATTTGGCTG-3^，。所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，具体为5^，-AACAAACAGCCACCTCAACC-3^，。

进一步地，所述CAPS标记的酶切位点位于西瓜第3号染色体16065178bp处，多态性表现为C/T碱基差异。

进一步地，所述CAPS标记的酶切位点与扩增所述CAPS标记的PCR引物具有相同的酶切位点。

再者，本发明给出了利用与西瓜叶片颜色相关的CAPS标记鉴定西瓜叶片颜色的方法。所述方法包括，

提取待测西瓜样品的基因组DNA；

利用所述CAPS标记的引物对西瓜基因组DNA进行PCR扩增；

酶切PCR扩增产物；