[发明专利]一种编辑绵羊FGF5基因实现选择性剪接的sgRNA、成套核酸分子和应用

权利要求书

1.一种编辑绵羊FGF5基因实现选择性剪接的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA由如SEQID No.1～SEQ ID No.6所示的核苷酸序列退火得到；

所述SEQ ID No.1和SEQ ID No.2两两退火；

所述SEQ ID No.3和SEQ ID No.4两两退火；

所述SEQ ID No.5和SEQ ID No.6两两退火。

2.一种成套核酸分子，其特征在于，包括权利要求1所述的sgRNA和lentiCRISPRv2慢病毒载体。

3.权利要求1所述的sgRNA在编辑绵羊FGF5基因中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

1)将lentiCRISPRv2慢病毒载体经BsmBI酶切，得到酶切载体，将所述的sgRNA与酶切载体连接，得到重组质粒；

2)将所述步骤1)得到的重组质粒与质粒psPAX2、pMD2.G共转染至293T细胞中，得到重组慢病毒；

3)将所述步骤2)得到的重组慢病毒感染绵羊肌细胞，实现sgRNA编辑绵羊FGF5基因。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤2)重组质粒的质量、质粒psPAX2的质量、质粒pMD2.G的质量与293T细胞铺板接种时的数量比为20μg:15μg:6μg:2～2.5×10⁶个。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述重组质粒与质粒psPAX2、pMD2.G通过磷酸钙转染法共转染至293T细胞中。