[发明专利]一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法。富硒蛋白多糖中加入双氧水和盐酸在水浴条件下进行消解，所得到的SeO₃^2‑定容后直接用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC‑ICP‑MS）进行测定。消解过程完成对硒化合物的氧化还原反应，操作简单，样品不需要在多个容器中进行转移；对样品的消解避免使用了混合酸，同时大大减少了酸的用量；避免了强氧化还原性酸对实验室环境的污染，同时可防止硒的挥发损失，得到较高回收率；避免pH值的调节，操作快速；消解时间短，约60分钟可以完成。

技术领域

本发明涉及一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法。

背景技术

目前，有关硒的检测检测方法和判定标准都是以硒的总量为标准，因此硒的总量检测尤为重要（卢晓林，2017）。

荧光分光光度法（Watkinson，1960；Hall，1969）是比较经典的总硒含量测定方法（Koike，1993），该方法在前处理过程中，样品须在HClO₄-HNO₃，甚至H₂SO₄中，高温条件下进行消解，再进行过夜放置（Ducros，1992）。Ducros （Ducros，1994）改进了上述方法，样品经H₂O₂-HNO₃加热回流微波消解再加入HCl进行酸化，整个消化过程45分钟。以上样品中的硒被统一氧化还原成四价，检测四价硒从而得到样品中总硒的含量。以上方法均涉及到高温加热装置，其次一个消解时间长，另一个涉及回流及微波功率的控制，给实际操作带来不便。

2015年，本申请人公开了酵母硒总硒、无机硒、有机硒含量的测定方法（CN104931468A），所述方法将样品经酸加热消化后，在盐酸介质中，将试样中的硒统一还原成四价硒，四价硒在微酸性条件下与2，3-二氨基萘（DAN）生成苤硒脑络生物，用环己烷萃取。用荧光光度计测定荧光强度，从而计算出样品中的硒含量。该方法用到浓硝酸、高氯酸等强氧化性的酸，并且酵母硒经氧化后需要再经盐酸进一步还原。得到的反应物需要再经过定容、调节pH值、DAN衍生化等系列操作。另外，2017年本申请人还公开了一种单质硒含量的测定方法（CN106323933A）。所述方法将待测单质硒样品在H₂O₂-HCl体系中常温下氧化还原，再利用荧光分光光度法测定其DAN衍生产物的荧光强度。该方法常温消解条件非常适用于单质硒，但不能解决富硒蛋白多糖样品所有硒化合物的消解问题。

发明内容

针对现有富硒蛋白多糖中总硒含量检测的需要，本发明提供了一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法，快速、环保、简便、精准。

一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法，水浴下向待测富硒蛋白多糖样品中加入双氧水和HCl，利用双氧水在酸性条件下的氧化性和HCl的还原性将样品中的硒化合物氧化还原成为SeO₃^2-离子，采用HPLC-ICP-MS测定⁷⁸Se，从而得到样品中的总硒含量。

所述的测定方法，步骤如下：称取25 mg的富硒蛋白多糖于50 mL离心管中，加入2mL 双氧水，再加入1.5 mL的6 M HCl，50℃水浴30 min，然后沸水浴30 min，将上述反应液转移到容量瓶中，并用水定容至500 mL，取出少量样品用0.22 µm水相滤膜过滤，随后测定其⁷⁸Se的离子强度，从而得到富硒蛋白多糖中总硒含量。

本发明的有益效果：