[发明专利]一种啤酒酵母中过表达芳香氨基酸转氨酶II Aro9的构建方法

权利要求书

1.一种啤酒酵母中过表达芳香族氨基酸转氨酶ⅡAro9的构建方法，包括以下步骤：

(1)菌体培养及啤酒酵母基因组的获得：首先将啤酒酵母TCCC 31194划三区培养，直至生长出单克隆，选取长势良好的单克隆平涂在平板上培养获得大量菌体，然后用SDS处理菌体获得啤酒酵母基因组；

(2)目的基因片段的获取：设计合理的同源引物，通过PCR技术扩增出Aro9(S.c)、Aro9(S.b)目的基因；

(3)基因过表达组件的构建：以pYPGE15质粒为载体，将KanMX基因插入其中，同时将Aro9(S.c)、Aro9(S.b)基因分别插入启动子PGK下游的BamHI酶切位点处，构建pYPGE15_KanMX_Aro9(S.c)、pYPGE15_KanMX_Aro9(S.b)表达载体；

(4)获得重组菌株：将pYPGE15_KanMX_Aro9表达载体转入大肠杆菌大量培养并验证正确后，再通过醋酸锂化学转化法转入啤酒酵母TCCC 31194中，得到TCCC 31194::Aro9(S.c)、TCCC 31194::Aro9(S.b)的重组酵母；

(5)啤酒发酵：将转化成功的酵母菌种进行培养，然后进行啤酒发酵，在适宜条件下培养10天；

(6)三醇四酯、芳香醇和芳香氨基酸含量及发酵性能检测。

2.根据权利要求1所述的一种啤酒酵母中过表达芳香族氨基酸转氨酶ⅡAro9的构建方法，其特征在于，采用质粒表达基因的方法构建载体，较整合至基因组的方法更为简便快速，大大缩短构建周期。

3.根据权利要求1所述的一种啤酒酵母中过表达芳香族氨基酸转氨酶ⅡAro9的构建方法，其特征在于，将啤酒酵母中原有的Aro9基因进行过表达，增加Aro9基因的原有拷贝数，增加了目的基因数量。

4.根据权利要求1所述的一种啤酒酵母中过表达芳香族氨基酸转氨酶ⅡAro9的构建方法，其特征在于，提高了重组啤酒酵母菌在芳香醇产生效率，优化啤酒酵母菌种，从而达到改善三醇四酯、芳香醇和芳香氨基酸含量，调节啤酒风味的目的。