[发明专利]斑节对虾雌性亲虾性腺促熟小干扰RNA组合物、试剂盒及使用方法

权利要求书

1.斑节对虾雌性亲虾性腺促熟小干扰RNA组合物，其特征是，包含针对斑节对虾CHH、MIH和VIH 3个抑制性腺发育的激素基因的小干扰RNA；所述三个小干扰RNA为CHH-siRNA、MIH-siRNA和VIH-siRNA，其中所述CHH-siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述MIH-siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述VIH-siRNA的正义链核苷酸序列如SEQID NO.5所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述小干扰RNA组合物中三种成分之间的质量比例为CHH-siRNA:MIH-siRNA:VIH-siRNA＝2:1:4。

2.根据权利要求1所述的斑节对虾雌性亲虾性腺促熟小干扰RNA组合物，其特征是，所述小干扰RNA组合物为CHH-siRNA、MIH-siRNA和VIH-siRNA的冻干粉混合物。

3.斑节对虾雌性亲虾性腺促熟试剂盒，其特征是，包含针对斑节对虾CHH、MIH和VIH3个抑制性腺发育的激素基因的小干扰RNA组合物；所述三个小干扰RNA为CHH-siRNA、MIH-siRNA和VIH-siRNA，其中CHH-siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；MIH-siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；VIH-siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反义链核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述小干扰RNA组合物中三种成分之间的质量比例为CHH-siRNA:MIH-siRNA:VIH-siRNA＝2:1:4。

4.根据权利要求3所述的斑节对虾雌性亲虾性腺促熟试剂盒，其特征是，所述小干扰RNA组合物为冻干粉混合物。

5.根据权利要求4所述的斑节对虾雌性亲虾性腺促熟试剂盒，其特征是，在一组试剂盒中，所述小干扰RNA组合物为70μg。

6.根据权利要求4所述的斑节对虾雌性亲虾性腺促熟试剂盒，其特征是，所述试剂盒还包括终浓度为0.05mol/L的硫酸钠溶液。

7.根据权利要求4所述的斑节对虾雌性亲虾性腺促熟试剂盒，其特征是，所述试剂盒还包括壳聚糖溶解于0.1mol/mL乙酸钠配制的溶液，所述溶液pH＝4.5，其中壳聚糖终浓度为0.03％。

8.一种权利要求3-7任一项所述斑节对虾雌性亲虾性腺促熟试剂盒的使用方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)对小干扰RNA组合物4000rpm离心30s，然后每份小干扰RNA组合物加入1ml终浓度为0.05mol/L的硫酸钠溶液，混匀；

(2)加入1ml壳聚糖乙酸钠溶液，55℃静置60s，转至漩涡振荡器振荡30s，静置15min；

(3)选取斑节对虾雌性亲虾作为促熟对象，促熟实验前避光暂养3天；

(4)按亲虾体重计算，每克亲虾于第二腹足处注射新鲜配制的工作液1μL。