[发明专利]一种用于同时检测多种疾病标志物电化学适配体传感器

权利要求书

1.一种电化学适配体传感器用于同时检测多种疾病标志物的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：选取材料和仪器：DNA序列名称包括DNA序列A1为CEA-Apt1，序列为5’-SH-TATCCAGCTTATTCAATT-3’、DNA序列A2为CEA-Apt2，其序列为5’-COOH-AGGGGGTGAAGGGATACCC-3’、DNA序列B1为PDGF-BBApt1，序列为5’-SH-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’、DNA序列B2为PDGF-BB Apt2，序列为5’-COOH-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’；

步骤2：PEI-Au的合成：在10.0mL 1.2mmol/L氯金酸溶液中快速加入1.0mL 4％PEI溶液，磁力搅拌下，升温至80℃，保持持续加热20min，待冷却至室温，得到PEI-Au；

步骤3：金属离子探针的制备：PEI-Au-A2-Cu²⁺的制备：首先，100μL 10μM A2溶液中加入1.0mg EDC和0.25g NHS，混合均匀，37℃反应1h；100μL PEI-Au加入以上体系，37℃300rpm振摇反应12h，8000rpm离心20min除去没有连上的A2，重新分散于200.0μL Cu(NO₃)₂溶液中，37℃反应12h，8000rpm离心20min除去上清液，重新分散在1xB2缓冲溶液中，制备完成PEI-Au-A2-Cu²⁺，同样的方法用于制备PEI-Au-B2-Pb²⁺，不同的是，将其分散在200.0μL Pb(NO₃)₂溶液中，37℃300rpm振摇反应12h，8000rpm 20min离心并洗涤数次后，将获得的金属探针分散在1xB2缓冲溶液中，4℃储存备用；

步骤4：电化学适配体传感器的制备：首先，分别用0.3μm和0.05μm的氧化铝粉对金电极表面进行抛光，并用超纯水冲洗，在超纯水溶液中超声15s；在0.5mol/L H₂SO₄溶液中进行CV扫描，清洁金电极的表面，氮气吹干后，立刻在金电极表面滴加10μL 1μM Apt1，室温放置过夜；超纯水冲洗电极，氮气吹干，滴加10.0μL 1mmol/L MCH，37℃避光反应40min；超纯水冲洗电极，氮气吹干，滴加10.0μL不同浓度的目标物CEA或PDGF-BB，超纯水冲洗电极，氮气吹干；最后滴加10.0μL金属离子探针溶液PEI-Au-A2-Cu²⁺或PEI-Au-B2-Pb²⁺，37℃反应120min，用0.1mol/L Tris-HCl冲洗电极，传感器制备完成，置于4℃储存备用；

步骤5：多个疾病标志物的检测：分别使用Cu²⁺和Pb²⁺合成两种金属探针PEI-Au-A2-Cu²⁺和PEI-Au-B2-Pb²⁺，按照1：1的比例混合得到用于同时检测的金属离子探针，同时检测的DPV扫描范围为-0.6V～0.6V。

2.根据权利要求1所述的一种电化学适配体传感器用于同时检测多种疾病标志物的方法，其特征在于：所述在步骤1中，电解质溶液为Tris-HCl缓冲液，pH＝7.4:0.1mol/L Tris，0.5mol/L NaCl，0.1mol/L KCl，0.1mol/L MgCl₂。

3.根据权利要求1所述的一种电化学适配体传感器用于同时检测多种疾病标志物的方法，其特征在于：所述在步骤1中，DNA缓冲液1X NEBuffer2：50mmol/L NaCl，10mmol/LTris-HCl，10mmol/L MgCl₂，1mmol/LDTT，pH为7.9。

4.根据权利要求1所述的一种电化学适配体传感器用于同时检测多种疾病标志物的方法，其特征在于：所述在步骤4中，滴加的目标物是CEA时，37℃反应90min。