[发明专利]用于五种幼儿腹泻病系列病毒检测的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于建立同时检测幼儿腹泻系列病毒，如诺如病毒GⅠ型和GⅠ/GⅡ型(NV GI、NV GI/GⅡ)、人星状病毒(HAstV)、轮状病毒A组(RV)和肠道腺病毒(EAdV)的极速检测试剂盒及其应用。本发明具备很高的灵敏度和特异性，其建立的方法与其他荧光定量PCR相比，可在半小时内获得结果，可达到临床快速检测，有望实现真正的POCT，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及用于五种幼儿腹泻病系列病毒检测的试剂盒及其应用。

背景技术

婴幼儿腹泻病是世界范围内影响婴幼儿健康的常见病和多发病。病毒性腹泻是导致全球婴幼儿急性重症腹泻的重要原因，此病也是发展中国家婴幼儿死亡的主要疾病。引起婴幼儿腹泻的病毒主要包括诺如病毒、人星状病毒、轮状病毒和肠道腺病毒等。

诺如病毒，又称诺瓦克病毒(Norwalk Viruses，NV)是人类杯状病毒科(HumanCalicivirus，HuCV)中诺如病毒(Norovirus，NV)属的原型代表株。它是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。NV为单股正链RNA病毒，颗粒直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称。电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。从急性胃肠炎病人的粪便中分离得到，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型。NV感染性腹泻是由诺如病毒属病毒引起的腹泻，其在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻暴发中，60-90％是由NV引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。在中国5岁以下腹泻儿童中，NV检出率为15％左右，血清抗体水平调查表明中国人群中NV的感染亦十分普遍。NV感染性腹泻具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。NV感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。

人星状病毒(Human Astrovirus，HAstV)属于星状病毒科哺乳动物星状病毒属，是一种单正链RNA病毒，于1975年从腹泻婴儿粪便中分离得到，球形，直径28-35nm，无包膜，电镜下表面结构呈星形，有5～6个角。该病毒呈世界性分布，粪-口传播，是引起婴幼儿、老年人及免疫功能低下者急性病毒性肠炎的重要病原之一，其致病性已日益受到重视，人类感染腺病毒主要症状是严重腹泻，伴随发热、恶心、呕吐。本病为自愈性疾病，大部分患者在出现症状2-3天时，症状会逐渐减轻，但也有极少数症状加重，造成脱水。

轮状病毒(Rotavirus，RV)是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科，是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一。全世界每年因轮状病毒感染导致的婴幼儿死亡的人数大约为900000人，其中大多数发生在发展中国家。在我国，0～2岁以内的婴幼儿人数约为4000万人(含新生儿)，每年大约有1000万婴幼儿患轮状病毒感染性胃肠炎，占婴幼儿人数的1/4，是引起婴幼儿严重腹泻的最主要病原。轮状病毒总共有七种，以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G。其中，A种是最为常见的一种，而人类轮状病毒感染超过90％的案例也都是该种造成的。其感染途径为粪-口途径，主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病，病程一般为6-7天，发热持续1-2天，呕吐2～3天，腹泻5天，严重出现脱水症状。