[发明专利]表达非洲猪瘟病毒p54、p30、E248R蛋白的重组腺病毒及构建方法

说明书

本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒及构建方法，该重组腺病毒感染细胞后可以同步表达非洲猪瘟p54、p30和E248R蛋白，其中p54和p30蛋白融合表达，E248R通过自裂解2A信号肽与p54和p30串联表达。本发明构建了能同时表达p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体，使用该载体与腺病毒骨架系统共转染细胞后获得可表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒，使用该重组腺病毒免疫试验动物后可以刺激试验动物产生特异性的抗体，为非洲猪瘟疫苗的开发提供了新的试验数据。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体、重组腺病毒及构建方法。

背景技术

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)是一种核质大DNA病毒，也是唯一虫媒DNA病毒，可感染家猪和野猪，具有较强的传染性和致病性。猪感染非洲猪瘟的临床症状与猪瘟和猪丹毒等疾病类似，其症状的严重程度与ASFV的毒力、感染计量和感染途径的不同而不同，根据临床症状的严重程度可以分为急性感染、亚急性感染和隐形感染等。急性感染表现为食欲减退、高热、白细胞减少、皮肤以及内脏器官的出血为主要特征，死亡几率较高，有的可达100％。亚急性感染表现为暂时性的血小板和包细胞减少，可观察到出血灶，同时可导致呼吸改变、流产和死亡，死亡率较急性感染低。到目前位置尚无针对非洲猪瘟的特效疫苗和治疗药物，因此国内外均采用强制捕杀的方式处理发病猪群。

非洲猪瘟于2018传入我国，截至目前在全国范围内报道的疫情超过150起。非洲猪瘟的爆发给我国生猪养殖业造成了巨大的经济损失。非洲猪瘟在我国出现的一年多时间内，我国能繁种猪存栏量由疫情出现前的约4000万头降低至最低峰的约1900万头，据不完全按统计，因非洲猪瘟导致的直接和间接经济损失可能超过1万亿元。非洲猪瘟爆发后，国内多个单位开展了非洲猪瘟疫苗研究，包括亚单位疫苗、多肽疫苗和基因缺失疫苗等，但截至目前尚无有效的疫苗问世。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体、重组腺病毒及构建方法。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种编码非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的核苷酸序列，该核苷酸序列如SEQID NO：1所示。

一种表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体，包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

上述表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体的构建方法，包括以下步骤：人工合成SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，并将其插入到pDC316-mCMV-EGFP载体中，制得。

一种表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒，包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列或上述重组腺病毒载体。

上述表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒的构建方法，包括以下步骤：

(1)人工合成SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，并将其插入到pDC316-mCMV-EGFP载体中；

(2)将步骤(1)构建的载体与pBHGloxdelE13cre载体共转染293A细胞后进行培养，制得。

上述重组腺病毒可以用于制备非洲猪瘟疫苗。

本发明提供的表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体、重组腺病毒及构建方法，具有以下有益效果：