[发明专利]抑制猪流行性腹泻病毒M基因表达的shRNA

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于抑制PEDV M基因表达的shRNA。本发明要解决的技术问题为猪流行性腹泻病毒变异多、增殖快、防疫困难。解决该问题的技术方案是提供一种用于抑制抑制PEDV复制的shRNA。该shRNA针对的靶点序列为：5’‑GCCAAGGCCACTACAACAATT‑3’。本发明shRNA能显著抑制M基因表达，从而抑制PEDV病毒的复制，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于抑制PEDV M基因表达的shRNA。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻(PED) 是一种以急性肠炎、呕吐和严重水样腹泻为特征的破坏性疾病，传染性极强。给全球生猪产业带来巨大的威胁和巨大的经济损失。PEDV的M基因在各种毒株之间保守性较高，全长681bp，分子量为27ku-32ku。作为组成病毒的表面结构蛋白，在病毒组装过程中发挥着非常重要的功能。有研究表明，M蛋白可以与M蛋白自身、N蛋白以及S蛋白相互作用。在感染PEDV的细胞中，病毒的M基因呈高表达，且对病毒的复制起着非常重要的作用。

RNA干扰在抵抗病毒入侵过程中起着十分重要的作用。基因沉默机制通常为小干扰 RNA或者短发夹RNA诱导实现靶mRNA降解，或者由小RNA抑制特定mRNA翻译。

研究表明,细胞为保护自身基因免受损害，如病毒入侵或转座子插入而采取基因沉默这一调节机制，目的是使入侵的外源基因失活，而不影响自身基因的表达，因此有学者称RNA 干扰为基因组的免疫系统。Shlomai以乙型肝炎(HBV)X区和核心区为靶点，构建siRNA 表达质粒pSUPER x和pSUPER core，将质粒分别导入HBV感染细胞后，发现能显著而特异性降低X蛋白和核心蛋白的表达水平(Shlomai,A.,and Shaul,Y.(2003).Inhibitionof hepatitis B virus expression and replication by RNAinterference.Hepatology(Baltimore,Md)37, 764-770.)。这表明，RNAi可以作为抗病毒的有力武器。尽管如此，RNAi最后要成为临床治疗的一种有效手段仍面临一些问题，比如siRNA稳定性的问题。体外合成siRNA虽然简单，但导入的siRNA易被RNase降解，且转染以瞬时表达为主。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中猪流行性腹泻病毒变异多、增殖快、防疫困难的技术问题。

本发明解决这一技术问题的技术方案是提供一种用于抑制抑制PEDV复制的shRNA。该shRNA针对的靶点序列为：5’-GCCAAGGCCACTACAACAATT-3’(SEQ ID NO.1)。

进一步的，所述shRNA的正义链或反义链的DNA序列如下所示：

正义链(SEQ ID NO.2)：

5’-AAGGTATATTGCTGTTGACAGTGAGCGCGCCAAGGCCACTACAACAATTTAG TGAAGCCACAGATGTAAATTGTTGTAGTGGCCTTGGCTTGCCTACTGCCTCG-3’；

反义链(SEQ ID NO.3)：

5’-CGAGGCAGTAGGCAAGCCAAGGCCACTACAACAATTTACATCTGTGGCTTCA CTAAATTGTTGTAGTGGCCTTGGCGCGCTCACTGTCAACAGCAATATACCTT-3’。

本发明还提供了上述的shRNA在制备用于抑制PEDV药物中的用途。

本发明也提供了一种重组载体，其含有上述的用于抑制PEDV M基因表达的shRNA。进一步的，上述的重组载体基于miR30骨架构建而成。