[发明专利]利用修饰的单链核酸进行靶核酸检测的方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的检测样品中靶核酸的方法，其特征在于，所述方法包括将样品与V型Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器接触，所述gRNA包括与所述V型Cas蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列；检测由V型Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸；所述单链核酸检测器不与所述gRNA杂交；

所述单链核酸检测器由至少4个连续的碱基为鸟嘌呤的核苷酸组成，并且所述单链核酸检测器中的一个或多个鸟嘌呤存在碱基修饰以使所述单链核酸检测器不存在4个以上连续的未经修饰的碱基为鸟嘌呤的核苷酸；

所述碱基修饰为对针对鸟嘌呤的脱氨修饰，所述鸟嘌呤脱氨修饰成为次黄嘌呤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链核酸检测器中的全部的鸟嘌呤都存在脱氨修饰，所述鸟嘌呤脱氨修饰成为次黄嘌呤。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述V型Cas蛋白选自Cas12、Cas14家族蛋白的任意一种或任意几种组合。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Cas12家族蛋白为Cas12i、Cas12j、Cas12a、Cas12b中的一种或任意几种组合。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Cas14家族蛋白选自Cas14a、Cas14b中的一种或任意几种组合。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，

所述Cas12a选自FnCas12a、AsCas12a、LbCas12a、Lb5Cas12a、HkCas12a、OsCas12a、TsCas12a、BbCas12a、BoCas12a或Lb4Cas12a中一种或任意几种；

所述Cas12b的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述Cas12i的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述Cas12j的氨基酸序列SEQ ID No.4所示。

7.根据权利要求1、2、4-6任一所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，胶体相变，电化学检测和基于半导体的检测。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，胶体相变，电化学检测和基于半导体的检测。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸为病毒核酸、细菌核酸或与疾病相关的特异核酸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述与疾病相关的特异核酸为特定的突变位点。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述特定的突变位点为SNP位点。

12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述病毒为植物病毒或动物病毒。

13.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述病毒包括乳头瘤病毒，肝DNA病毒，疱疹病毒，腺病毒，痘病毒，细小病毒，或冠状病毒。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述冠状病毒包括SARS、SARS-CoV2、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1或Mers-Cov。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸来源于微生物、动物、植物或人体。