[发明专利]用于β-地中海贫血基因突变多重实时荧光PCR检测的引物和探针组合及试剂盒

说明书

本发明提供了用于β‑地中海贫血基因突变多重实时荧光PCR检测的引物和探针组合及试剂盒，属于分子生物学检测技术领域；所述引物和探针组合包括第1组引物和探针组合～第12组引物和探针组合中的一组或几组；每组引物和探针组合中包括用于检测两种β‑地中海贫血基因突变型和对应的两种野生型的引物和探针；突变型情况由FAM荧光通道或HEX荧光通道指示，野生型由ROX荧光通道或CY5荧光通道指示；本发明的引物和探针组合能够对β‑地中海贫血突变基因的突变型与野生型中两个或多个位点同时进行检测，并通过四个不同的荧光通道读取信息读取检测结果，实现β‑地中海贫血的高通量、特异性检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及用于β-地中海贫血基因突变多重实时荧光PCR检测的引物和探针组合及试剂盒。

背景技术

β-地中海贫血是由于β株蛋白基因的缺失或缺陷使β株蛋白链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血，主要的突变方式为点突变，少数为缺失突变。完全不能合成β链称β0地贫，能够部分合成β链称β+地贫，可以通过不同的组合形成：β0地贫纯合子(β0/β0)、β0地贫双重杂合子(β0/β+)、β0杂合子(β0/βA)、β+地贫纯合子(β+/β+)和β+地贫杂合子(β+/βA)。其中重型β-地中海贫血的患者为β+地贫纯合子、β0地贫纯合子、β0地贫双重杂合子这些患者的β链几乎不能合成，引起溶血性贫血；中间型地贫的患者通常是某些β地贫变异型的纯合子，如β+地贫纯合子；轻型地贫是β0或β+地贫的杂合子状态，β链的合成仅轻度减少，故其病理生理改变极轻微。

β-地中海贫血是一组遗传性疾病，其临床表现多样，由轻到重，可以从正常到反复输血，甚至危及生命，导致患者在未成年即夭折甚至胎死腹中，给家庭和社会带来巨大的负担。且目前尚无根治手段，国内外都没有疗效标准。因此控制和降低β-地中海贫血患儿的出生率才能有效地监控该病的发生，通过人群筛查和遗传咨询，对有携带β地贫基因的孕龄夫妇所孕胎儿实施产前诊断，是目前最有效的控制重症β-地中海贫血患儿出生的方法。

DNA直接测序法是进行β-地中海贫血基因突变检测最直接最准确的方法，是检测未知的地贫突变基因的关键方法。但其需要对样品进行扩增、纯化、序列分析，所需的时间长，成本高，对取材和技术的要求都比较高。因此在临床应用上具有一定的限制。

反向点杂交法(RDB)是β-地中海贫血基因突变目前国内外最常用的技术，其优点在于一张杂交膜上可同时筛查多种点突变，从而改变了传统杂交法一次只能检测一种突变的方式。对于目前国内外的β-地中海基因突变的筛查试剂也大多使用该方法。但是该方法过程复杂，耗时长，容易污染出现假阳性，并且灵敏度较低，出现漏检现象。

实时荧光PCR技术是近几年发展起来的一种新技术，该技术在常规的PCR基础上加入了荧光标记探针或相应的荧光染料来实现定量或定性的功能。它摆脱了凝胶电泳技术，避免了有毒操作，操作简便。当前也有部分研究选择使用实时荧光PCR技术用于β-地中海贫血基因突变的检测，但都是单管检测一个位点，无法单管检测多个位点，无法进行高通量检测。

发明内容

本发明的目的在于提供用于β-地中海贫血基因突变多重实时荧光PCR检测的引物和探针组合及试剂盒，本发明的引物和探针及试剂盒能够实现对β-地中海贫血基因突变进行检测，实现高通量检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了用于β-地中海贫血基因突变多重实时荧光PCR检测的引物和探针组合，包括第1组引物和探针组合～第12组引物和探针组合中的一组或几组，每个组合中，引物和探针组合单独包装；