[发明专利]一种黄曲霉毒素电化学传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨成镜面，超纯水清洗干净；

（2）将6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的AuPt纳米粒子溶液滴涂于上述电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的黄曲霉毒素捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL、质量分数为1%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上的非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，除去未结合的BSA，4℃冰箱中晾干；

（5）继续滴加6 µL、10 pg/mL ~ 60 ng/mL的一系列不同浓度的黄曲霉毒素抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

（6）继续滴加6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL的检测抗体孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液于电极表面，置4 ℃冰箱中孵化40 min、超纯水冲洗、晾干，制得一种黄曲霉毒素电化学传感器；

所述AuPt纳米粒子溶液的制备，步骤如下：

（1）AuPt纳米粒子的制备

在1.0 mL超纯水中依次加入50 ~ 150 mg泊洛沙姆F127、20 ~ 40 mg碘化钾，搅拌均匀；加入0.8 mL、10 ~ 30 mmol/L氯铂酸、2.5 mL、10 ~ 30 mmol/L氯金酸，搅拌均匀；加入2.5 mL、0.05 ~ 0.15 mol/L抗坏血酸，90 ℃反应15 min；超纯水和乙醇分别离心清洗三次，60 ℃干燥12 h，制得AuPt纳米粒子；

（2）AuPt纳米粒子溶液的制备

将5 ~ 15 mg AuPt纳米粒子分散到在5 mL超纯水中，超声10 min，制得AuPt纳米粒子溶液；

所述检测抗体孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液的制备，步骤如下：

（1）Au/Cu_xO@CeO₂的制备

将100 mL、0.01 mol/L氯化铜溶液，置于55 ℃水浴中；加入10 mL、2 mol/L氢氧化钠溶液，反应30 min；再加入10 mL、0.6 mol/L抗坏血酸，反应3 h；超纯水和乙醇分别离心清洗三次，60 ℃真空干燥5 h，制得Cu₂O立方；

在30 mL超纯水中加入20 ~ 40 mg Cu₂O立方，搅拌均匀，加入500 ~ 700 μL、0.1 mol/L硝酸铈，加热至60 ℃；加入3.0 ~ 4.0 mL、0.15 mol/L氨水，反应3 h；加入55 ~75 μL、20mmol/L氯金酸，反应15 min；加入65 μL、20 mmol/L柠檬酸钠，反应30 min；超纯水离心清洗三次，60 ℃真空干燥8~12 h，制得Au/Cu_xO@CeO₂；

所述氯化铜溶液是在100 mL超纯水中加入0.14g氯化铜，搅拌5 min而制得；

（2）检测抗体孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液的制备

将1.0 ~ 3.0 mL浓度为2 mg/mL的Au/Cu_xO@CeO₂溶液加入到0.5 ~ 1.5 mL浓度为10 μg/mL的黄曲霉毒素检测抗体溶液Ab₂中，4 ℃恒温振荡箱中震荡孵化12 h，离心洗涤，加入1.0 ~ 3.0 mL、pH = 7.38的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物Au/Cu_xO@CeO₂-Ab₂溶液，4 ℃下保存备用。

2.如权利要求1所述的一种黄曲霉毒素电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述黄曲霉毒素选自下列之一：黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G1。