[发明专利]一种DNA分子及其应用和获得高根量苎麻植株的方法有效
申请号: | 202010552855.0 | 申请日: | 2020-06-17 |
公开(公告)号: | CN111575292B | 公开(公告)日: | 2021-09-17 |
发明(设计)人: | 高钢;朱爱国;喻春明;陈平;陈坤梅;王晓飞;陈继康 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院麻类研究所 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N15/84;C12N1/21;A01H4/00;A01H5/06;A01H6/84 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人: | 潘颖 |
地址: | 410205 湖南*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 dna 分子 及其 应用 获得 高根 苎麻 植株 方法 | ||
1.一种DNA分子,其特征在于,所述DNA分子的碱基序列如SEQ ID NO:3所示,其为将苎麻BnWOX8基因5’端非翻译区翻译起始位点上游的2000~2500bp序列替换为SEQ ID NO:1的序列。
2.根据权利要求1所述的DNA分子,其特征在于,所述苎麻BnWOX8基因的编码序列如SEQID NO:2所示。
3.权利要求1或2所述DNA分子在制备高根量苎麻植株中的应用。
4.一种重组表达载体,其特征在于,其包含权利要求1或2所述DNA分子。
5.一种重组农杆菌菌株,其特征在于,其包含权利要求4所述重组表达载体。
6.一种获得高根量苎麻植株的方法,其特征在于,包括如下步骤:
将苎麻BnWOX8基因5’端非翻译区翻译起始位点上游的2000~2500bp序列替换为SEQID NO:1的序列,得到经过修饰的DNA分子;所述苎麻BnWOX8基因的编码序列如SEQ ID NO:2所示;
将经过修饰的DNA分子与表达载体连接,得到重组表达载体;
将重组表达载体转化入农杆菌,得到重组农杆菌菌株;
制备苎麻愈伤组织,将重组农杆菌菌株转化入苎麻愈伤组织,经过分化培养、生根培养,得到高根量苎麻植株。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述制备苎麻愈伤组织所用愈伤分化培养基为:MS+0.1~1.0mg/L TDZ+0.01~0.1mg/L 2,4-D+0.005~0.015mg/L IAA。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述分化培养所用愈伤分化培养基为:MS+0.1~1.0mg/L TDZ+0.01~0.1mg/L 2,4-D+0.005~0.015mg/L IAA+100~1000mg/L羧苄青霉素+10~100mg/L卡那青霉素。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法,其特征在于,所述生根培养所用生根培养基为:MS+0.005~0.015mg/LNAA。
10.一种获得高根量苎麻植株的方法,其特征在于,包括如下步骤:
将苎麻BnWOX8基因5’端非翻译区翻译起始位点上游的2000~2500bp序列替换为SEQID NO:1的序列,得到经过修饰的DNA分子;所述苎麻BnWOX8基因的编码序列如SEQ ID NO:2所示;
将经过修饰的DNA分子与表达载体连接,得到重组表达载体;
制备苎麻原生质体细胞,利用PEG介导转化法将重组表达载体转入原生质体细胞中,经培养,得到愈伤组织;
愈伤组织经过分化培养,筛选得到高根量苎麻植株。
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