[发明专利]微流控过滤芯片、基于AuNPs的核酸三重检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种微流控过滤芯片，其特征在于：该芯片从上到下依次包括加样层、过滤层、检测层；其中，所述加样层上设有第一微腔；所述过滤层上与所述第一微腔对应的位置设有过滤膜；所述检测层上与所述过滤膜对应的位置设有第二微腔；进入所述第一微腔中的混合物在驱动力的作用下经过所述过滤膜进入所述第二微腔中，实现固液分离。

2.根据权利要求1所述的微流控过滤芯片，其特征在于：所述的过滤膜为纳米孔径的过滤膜。

3.根据权利要求1所述的微流控过滤芯片，其特征在于：所述的检测层上设有第三微腔，所述第三微腔通过微流道与所述第二微腔连接。

4.根据权利要求3所述的微流控过滤芯片，其特征在于：所述的加样层上方设有抽吸层，所述抽吸层与所述第三微腔连接，用于传递负压抽吸力。

5.根据权利要求1-4任一项所述的微流控过滤芯片，其特征在于：所述的检测层下方设有多聚赖氨酸衬底。

6.根据权利要求1-4任一项所述的微流控过滤芯片，其特征在于：所述检测层和过滤层之间设置有阀门控制层，用于控制所述第二微腔与第三微腔之间微流道的通断。

7.一种基于AuNPs的核酸三重检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括权利要求5所述的微流控过滤芯片。

8.根据权利要求7所述的基于AuNPs的核酸三重检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括修饰有荧光基团的核酸探针、AuNPs溶液。

9.根据权利要求8所述的基于AuNPs的核酸三重检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括核酸标准品溶液。

10.一种基于AuNPs的核酸三重检测方法，其特征在于，包括：

（1）将核酸探针溶液添加到AuNPs溶液中，并在室温下孵育20-40分钟；

（2）将梯度浓度的核酸标准品溶液添加到步骤（1）的混合溶液中，并在室温下孵育20-30分钟；

（3）添加5X SSC以达到AuNP的聚集，并将混合物孵育5-15分钟；

（4）测定步骤（3）孵育后溶液的吸光度；

（5）测完吸光度之后的溶液倒进微流控过滤芯片中，进行固液分离，分离之后的固相AuNPs被留在滤膜表面；液相被吸附在多聚赖氨酸衬底表面；

（6）对固相AuNPs上附着的核酸探针进行拉曼检测，对多聚赖氨酸衬底上的液相进行荧光检测；

（7）根据测得的吸光度、荧光值、拉曼值，采用双对数坐标，以核酸浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，根据柱状图做直线拟合，得到标准曲线；

（8）测定待测核酸的荧光值，对照标准曲线，判断其是否表达异常。