[发明专利]一种柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法

权利要求书

1.一种柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)外植体采集：采集枝条上的叶片作为外植体；

(2)叶片愈伤组织诱导培养：对叶片消毒后进行切割诱导形成愈伤组织；

(3)不定芽诱导培养：对愈伤组织进行不定芽培养，得到不定芽芽丛；

(4)生根培养：对不定芽芽丛进行生根培养，得试管苗；

(5)移植：将试管苗进行移植，得种苗。

2.根据权利要求1所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述步骤(1)，在一年生柄翅果枝条上采集叶片作为外植体。

3.根据权利要求1所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，先对叶片用水冲洗，然后浸泡在乙醇中，再使用H₂O₂消毒并用水冲洗；最后将消毒后的叶片进行切割，并将其叶面朝上水平接种到叶片愈伤组织诱导培养基中培养至少30天。

4.根据权利要求3所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述叶片愈伤组织诱导培养基的条件为：

N₆培养基，3.0mg/L核黄素，0.5mg/L PVP，1.0mg/L 2，4-D，0.5mg/L NAA，0.5mg/L活性碳，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

5.根据权利要求1所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将愈伤组织中与叶片愈伤组织诱导培养基接触的部分切除后，移植到不定芽诱导培养基中培养至少25天。

6.根据权利要求5所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述不定芽诱导培养基的条件为：

N₆培养基，4.0mg/L核黄素，0.5mg/L PVP，0.5mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA，0.5mg/L活性碳，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH值为5.4-5.8。

7.根据权利要求1所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，将定芽芽丛分成单个的不定芽后将不定芽接种到生根培养基中培养至少20天。

8.根据权利要求7所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述生根培养基的条件为：

1/2MS培养基，0.5mg/L IBA，1.0mg/L NAA，35g/L蔗糖，4.0g/L琼脂，pH值为5.4-5.8。

9.根据权利要求1所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，将试管苗移植至温室大棚中炼苗至少10天，然后再试管苗洗净根部的培养基移植于砖红壤、腐质土基质的混合土壤中栽培成苗即得柄翅果种苗。

10.根据权利要求1-9任一所述的柄翅果叶片愈伤组织诱导茎芽扩繁的方法，其特征在于：在步骤(2)中，培养条件为：温度26-30℃，光照强度为2800-3000lx，光照时间为12-14小时/天；湿度60％-70％；

在步骤(3)和步骤(4)中，培养条件为：温度25-28℃，光照强度为2000-2500lx，光照时间为10-12小时/天；湿度60％-70％。