[发明专利]双色荧光双重检测的微流控芯片及方法

权利要求书

1.双色荧光双重检测的微流控芯片，包括盖片和基片，其特征在于：所述的盖片为双层结构，包括阀门控制层和微流道层；所述阀门控制层用于控制所述微流道层流道内液体走向；所述微流道层包括多个检测单元，每个检测单元包括两条微流道；所述微流道的一端设有进样孔，另一端设有微腔和出样孔；所述的基片上，与所述微流道对应的位置修饰有纳米级氧化石墨烯或石墨烯材料，与所述微腔对应的位置修饰有戊二醛。

2.根据权利要求1所述的双色荧光双重检测的微流控芯片，其特征在于：所述的进样孔包括探针进样孔和样品进样孔，所述两条微流道分别与两个不同的探针进样孔连接，与同一个样品进样孔连接。

3.根据权利要求2所述的双色荧光双重检测的微流控芯片，其特征在于：两条微流道分别与两个不同的微腔连接，所述两个微腔之间不连通。

4.根据权利要求2所述的双色荧光双重检测的微流控芯片，其特征在于：两条微流道与同一个微腔连接。

5.根据权利要求1-4任一项所述的双色荧光双重检测的微流控芯片，其特征在于：所述的阀门控制层包括若干控制液体进入和流出所述微流道的阀门、进/出水口，以及连接所述进/出水口与阀门之间的流道。

6.根据权利要求1-4任一项所述的双色荧光双重检测的微流控芯片，其特征在于：所述基片上修饰的纳米级氧化石墨烯或石墨烯材料上，铺设带有荧光基团或者经荧光染色的探针。

7.一种双色荧光双重检测方法，其特征在于，包括：

关闭微流道与微腔之间的阀门；

通过两个不同的探针进样孔，分别向两条微流道内注入不同的DNA探针，使其充满流道，孵育0.5-2h；

通过出样口排出多余的液体，并用PBS冲洗微流道，去除没有吸附在基片上的单链DNA；

对流道中的DNA探针的荧光信号进行检测；

打开微流道与微腔之间的阀门，关闭出样口及DNA进样孔处的阀门，然后从样品进样孔注入待测样本，使用氮气同时将其推入到两条流道中；

待测样品与微流道内的DNA探针反应后经微流道流入微腔内；

对流道内和进入微腔内的液体进行荧光检测；

根据不同的荧光颜色和荧光强度，判断待测样本中是否含目标miRNA。

8.根据权利要求7所述的双色荧光双重检测方法，其特征在于，将流道内液体荧光的检测结果与DNA探针的荧光信号进行对比，或者根据微腔中荧光强度，判断待测样本中目标miRNA的含量。

9.根据权利要求7或8所述的双色荧光双重检测方法，其特征在于，所述的DNA探针的3’端修饰有NH₂C₆基团。

10.根据权利要求7或8所述的双色荧光双重检测方法，其特征在于，所述NDA探针采用荧光染料进行染色，或者在所述DNA探针的5’端修饰荧光基团。