[发明专利]检测rs9273471位点多态性的试剂及其应用

说明书

本发明属于分子生物学和医学领域，涉及一种检测rs9273471位点多态性的试剂及其应用。通过该位点基因型的检测结果来预测成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患病风险或者预测区分LADA和2型糖尿病(T2DM)。本发明还公开了相应的检测试剂盒，该试剂盒含有扩增rs9273471位点的引物以及检测该位点基因型的引物。利用本发明检测rs9273471位点的基因型，方法简单易行,快速高效，成本低廉,为LADA的诊断和治疗提供了一个简捷的新途径。

技术领域：

本发明涉及分子生物学和医学领域，涉及人HLA基因单核苷酸多态性位点rs9273471的检测试剂，及其在制备LADA相关性风险评估试剂中的应用。

背景技术：

成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)是一种成人发病、存在糖尿病相关自身抗体、诊断后一段时间内不需要胰岛素治疗的自身免疫性糖尿病，是成人型自身免疫性糖尿病中最常见的一种，也可能是最常见的自身免疫性糖尿病。免疫方面，谷氨酸脱羧酶自身抗体是成人糖尿病患者最常见的自身抗体。

作为1型糖尿病(T1DM)的一种特殊亚型，LADA也是一种T细胞介导的自身免疫性疾病，其与胰岛β细胞表面异常表达的HLA II类抗原相关，HLA基因又称为人类主要组织相容性复合体，位于第6对染色体的短臂上，整个复合体上有近60个基因座，根据编码分子特性的不同，可将整个复合体的基因分成三类：I类、II类、III类。II类基因区位于着丝点的近端，是结构最为复杂的一个区，主要由DR、DQ、DP三个亚区构成，每个亚区又有若干个位点，其中本发明研究的rs9273471位点就是II类基因上DQ亚区的一个位点。CD4⁺的T细胞表面受体与HLA II类分子与抗原肽形成的复合物结合，刺激辅助性T细胞分泌细胞因子等，从而参与LADA的发病过程。T细胞和抗原递呈细胞浸润胰岛是一个漫长的过程，导致LADA的发病可在免疫反应发生后的数月至数年发生。

糖尿病是一种多因素疾病，是由环境和遗传危险因素之间复杂的相互作用引起的。1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)的遗传决定因素已经得到了广泛的研究，而对成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的研究却很少。为了最终实现治疗LADA，本领域迫切需要寻求LADA的易感基因，并开发检测LADA易感基因的方法、试剂盒，以及相关治疗药物。此外，由于临床症状的相似，LADA患者常常被误诊为2型糖尿病。为了将LADA与其他类型的糖尿病区分开来，对LADA患者进行更加精准的治疗，LADA的检测与治疗需要专门的策略。

发明内容：

本发明的首要目的是提供一种检测rs9273471位点多态性的试剂在制备预测LADA患病风险制剂中的应用。该多态性位点是首次被发现与LADA患病风险相关，该位点基因型用于判定LADA患病风险，预测准确性高，可信度大。

进一步的，所述的rs9273471位点多态性为：AA,AG或GG。

本发明发现携带rs9273471GG基因型的人群中正常人人数远高于LADA患者人数，提示GG基因型患者患LADA的风险低，另外两种基因型AA和AG均以GG基因型为参比。

本发明以LADA病例和正常对照各500例左右进行统计学分析发现：rs9273471位点基因型为AA时，相对于基因型为GG的比值比OR为4.14，且p值小于0.05，具有显著性差异。即携带rs9273471AA基因型的人群患LADA的风险显著升高，是GG基因型人群患LADA风险的4.14倍；rs9273471位点基因型为AG时，相对于基因型为GG的比值比OR为1.31，但p值大于0.05，不具有显著性差异，因此，rs9273471位点基因型为AG时，不足以判断患LADA的风险。

进一步的，本发明得到的结论为：检测对象rs9273471位点基因型为AA时，LADA患病风险高于基因型为GG。

进一步的，上述检测rs9273471位点多态性的试剂可以预测以下几种情形：