[发明专利]一种依达拉奉中1,3-二苯-1-三氮烯的液相色谱检测方法

说明书

本发明提供了一种测定依达拉奉中1,3‑二苯‑1‑三氮烯的液相色谱检测方法，本法采用高效液相色谱法，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱温为25～35℃；检测波长为354±2nm；流速为0.9～1.1ml/min；流动相为有机相乙腈占总体积比例为55～65％，0.02mol/l磷酸二氢钾水溶液相占总体积比例为35～45％，0.02mol/l磷酸二氢钾水溶液pH为5.8～6.2；方法的专属性、线性及范围、精密度、耐用性等试验均良好；本方法设计合理，流动相配制简单，运行时间短，节约成本，检测方法科学、客观，能简便快捷地检测依达拉奉中1,3‑二苯‑1‑三氮烯含量，可用于依达拉奉产品的质量控制，具有实用价值。

技术领域

本发明属于药品质量检测领域，具体而言，涉及一种测定依达拉奉中1,3-二苯-1-三氮烯的液相色谱检测方法。

背景技术

依达拉奉，中文化学名为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，分子式为C₁₀H₁₀N₂O，分子量为174.20，依达拉奉结构式：

依达拉奉是一种新型的脑保护剂，又是自由基清除剂。它主要用于改善急性脑梗塞的患者所出现的神经症状，改善其日常生活能力和功能障碍。急性脑梗塞的患者，通常会出现肢体活动不灵活、说话含糊不清或不流利、头晕、头痛、手脚发麻的症状。在急性期给予静脉输注依达拉奉，可以阻止脑水肿的发生，阻止肢体活动不灵、言语不清等症状的进一步发展，缓解脑梗塞的症状，起到抑制脑细胞坏死的作用。依达拉奉主要作用于血管内皮细胞，防止损伤、清除自由基。因此，依达拉奉广泛用于临床治疗急性脑梗塞，可以有效的缓解患者的神经功能症状。

目前，赵悦，马利华等公开了“一种依达拉奉及其氯化钠注射液中遗传毒性杂质检测方法”，公开号为CN108120772A，仅对苯肼、苯胺和联苯胺进行了描述，并未对本文的1,3-二苯-1-三氮烯(中文别名：重氮氨基苯)，进行控制和研究，而1,3-二苯-1-三氮烯作为遗传毒性结构物质对药物的质量控制及用药安全起着不可忽略的作用，1,3-二苯-1-三氮烯分子式为C₁₂H₁₁N₃，分子量为197.26，结构式：

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种依达拉奉中1,3-二苯-1-三氮烯的液相色谱检测方法：

(1)色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；

柱温：25～35℃；

检测波长：354±2nm；

流速：0.9～1.1ml/min；

流动相：0.02mol/l磷酸二氢钾水溶液与乙腈的体积比是35～55％：45～65％；0.02mol/l磷酸二氢钾水溶液pH为5.8～6.2；

(2)供试品溶液：精密称取依达拉奉约250mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；

(3)杂质标准溶液：精密称取1,3-二苯-1-三氮烯约20mg于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精取5.0ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为杂质标准浓溶液，精取杂质标准浓溶液1.0ml于100ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为杂质标准贮备液，精取杂质标准贮备液1.0ml于25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为杂质标准溶液；

(4)测定法：精密量取样品溶液和杂质标准溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按峰面积外标法计算。

所述的色谱柱尺寸为4.6×250mm,5um；

柱温：30℃；