[发明专利]猪星状病毒间接ELISA检测试剂盒有效

专利信息
申请号: 202010555543.5 申请日: 2020-06-17
公开(公告)号: CN111551750B 公开(公告)日: 2023-10-10
发明(设计)人: 黄伟坚;王蔚怡;刘欢;郑瑞程;张文超 申请(专利权)人: 广西大学
主分类号: G01N33/68 分类号: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/543;C12N15/70;C12N15/40
代理公司: 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 代理人: 杨立华
地址: 530004 广西壮族*** 国省代码: 广西;45
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摘要:
搜索关键词: 星状 病毒 间接 elisa 检测 试剂盒
【说明书】:

发明公开了一种猪星状病毒间接ELISA检测试剂盒,包括预先包被的ELISA反应板,预先包被的ELISA反应板以猪星状病毒Capside保守区蛋白(pGEX‑4T‑1‑cap‑1蛋白)作为包被抗原。试验证明,本发明猪星状病毒间接ELISA检测试剂盒,能准确灵敏地检测猪血清中的性抓个病毒抗体,从而对样品进行定性判断。而且,样品前处理过程简单,耗时少,敏感性好,能同时检测大量的样品,样品检测成本远低于传统的仪器检测方法。综上,本发明对解决大批量样品的猪星状病毒现场检测技术具有重要的现实意义。

技术领域

本发明属于猪星状病毒检测技术领域,尤其涉及一种猪星状病毒间接ELISA检测试剂盒。

背景技术

近年来在国内外的养殖场中,猪星状病毒(porcine astrovirus,PAstV)常与其他肠道病毒混合感染引起仔猪腹泻,并造成不小的经济损失。PAstV Capside可以刺激机体产生免疫应答,是研究检测诊断试剂的首选蛋白。

猪星状病毒的诊断较为常见的方法有流行病学、分子诊断及病毒分离诊断等,但这些方法中有的诊断时间较长,有的检测结果不理想,有的不便于临床大量检测。ELISA方法具有快速定性和定量、灵敏度高、适用范围广、结果判定客观、成本低和可同时进行数千份样品的检测等优点。目前,国内外并没有关于猪星状病毒相关ELISA检测试剂盒的产品报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种具有高特异性、高灵敏度、高准确度、高精确度、操作简单的星状病毒间接ELISA检测试剂盒,以便于实现猪星状病毒的批量、快速血清学检测。

为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:

猪星状病毒间接ELISA检测试剂盒,包括预先包被的ELISA反应板,预先包被的ELISA反应板以猪星状病毒Capside保守区蛋白作为包被抗原。

猪星状病毒Capside保守区蛋白由序列表SEQ.ID.No.1的基因碱基序列编码或者具有SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。

上述猪星状病毒间接ELISA检测试剂盒,还包括标准阴性血清、标准阳性血清、辣根过氧化物酶HRP标记山羊抗猪IgG、洗涤液、稀释液、包被液、封闭液、底物液、终止液。

洗涤液和稀释液均为PBST洗涤液;包被液为PH9.6 Na2CO3-NaHCO3缓冲液;封闭液为5%胎牛血清;底物液为TMB显色液;终止液为2mol/L的硫酸溶液。

洗涤液和稀释液均为PBST洗涤液,按以下进行配制:将准确称量的8g NaCl、0.2gKCl、2.9g Na2HPO4.12H2O和0.2g KH2PO4充分溶解在800mL去离子水中,然后将pH值调节到7,然后加去离子水定容至1L,再加入500μL Tween-20;

包被液为pH9.6 Na2CO3-NaHCO3缓冲液,按以下进行配制:将1.59g Na2CO3和2.93gNaHCO3加水充分溶解后,将pH调到9.6后,加去离子水定容为1L,即得;

底物液为TMB显色液,包括TMB显色A液和B液,使用前进行1:1配制。

包被抗原按以下方法进行制备:根据猪星状病毒全长感染性克隆质粒为模板,利用设计合成的特异性引物对猪星状病毒I型Capsid基因保守区进行PCR扩增,并将目的基因回收连接到pGEX-4T-1质粒中,经鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后采用SDS-PAGE分析蛋白质的表达情况;亲和层析法分离纯化得到目的蛋白pGEX-4T-1-cap-1蛋白。

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