[发明专利]一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法

权利要求书

1.一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.将多能干细胞在多能干细胞培养基中，进行培养多能干细胞团块；

S2.将培养的多能干细胞通过消化剂消化为单个细胞或者较小的多能干细胞团块；

S3.将消化后的多能干细胞按照1×10⁶的细胞数接种至直径100mm的培养皿中，对干细胞继续进行培养；

S4.将培养后的细胞进行过滤，去除杂质；

S5.将过滤后的细胞利用微孔板材进行离心，经过离心，形成紧压的细胞群；

S6.将细胞群进行收集、聚拢，重悬于分化培养基中，使其形成较紧实的细胞球体；

S7.将细胞球体继续培养，形成拟胚体。

2.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法，其特征在于：所述多能干细胞培养基包括F12培养基、DMEM营养成分、碳酸氢钠、硒酸钠、胰岛素生长因子、铁蛋白、转化生长因子。转化生长因子，可以使多能干细胞多能性不变，而且细胞能够正常生长。

3.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法，其特征在于：所述培养皿中的培养基为多功能干细胞培养基，所述培养时间为2～4天，所述细胞通过细胞过滤筛网进行过滤，所述细胞通过细胞过滤筛网进行过滤。转化生长因子，可以使多能干细胞多能性不变，而且细胞能够正常生长。

4.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法，其特征在于：所述杂质为培养基的营养物质、死亡细胞、破碎细胞以及游离的单个细胞。转化生长因子，可以使多能干细胞多能性不变，而且细胞能够正常生长。

5.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法，其特征在于：所述离心通过离心机与微孔板材结合实现，转速为700～1500r/min,所述离心时长为8～12分钟。

6.根据权利要求1所述的一种诱导多能干细胞快速高效制备拟胚体的方法，其特征在于：所述消化剂的材料为胰蛋白酶—乙二胺四乙酸消化液，所用浓度为0.1％～0.25％。