[发明专利]脐带血造血干细胞冻存方法在审
| 申请号： | 202010558339.9 | 申请日： | 2020-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN111685103A | 公开（公告）日： | 2020-09-22 |
| 发明（设计）人： | 钟桂强;胡隽源;刘沐芸;梁晓;苏华莹;张芬;王清芳;钟振忠 | 申请（专利权）人： | 深圳市北科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 深圳市精英专利事务所 44242 | 代理人： | 蒋学超 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脐带血 造血 干细胞 方法 | ||
1.一种脐带血造血干细胞冻存方法，包括：
S1、将脐带血造血干细胞、右旋糖酐和DMSO按体积比8:1:1混匀，形成混合溶液；
S2、将混合溶液装入冻存袋；
S3、将冻存袋放在第一温度T1的环境下保持第一时长t1，其中3℃＜T1＜5℃，25min＜t1＜35min；
S4、将冻存袋放在第二温度T2的环境下保持第二时长t2，其中-25℃＜T2＜-15℃，110min＜t2＜130min；
S5、将冻存袋放在第三温度T3的环境下保持第三时长t3，其中-85℃＜T3＜-75℃，11H＜t3＜13H；
S6、将冻存袋放在第四温度T4的环境下保存，其中T4≤-150℃。
2.如权利要求1所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在步骤S1之中，将细胞浓度为2*107个/ml脐带血造血干细胞、10％右旋糖酐和10％DMSO按体积比8:1:1混匀，形成混合溶液。
3.如权利要求2所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：
所述第一温度T1＝4℃，所述第一时长t1＝30min；
所述第二温度T2＝-20℃，所述第二时长t2＝2H；
所述第三温度T3＝-80℃，所述第三时长t3＝12H。
4.如权利要求3所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在步骤S2之中，所述冻存袋的容量为L，其中，25ml≤L≤50ml。
5.如权利要求4所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：
在将冻存袋放在第二温度的环境下保持第二时长的步骤之中，转移温度不高于T1；
在将冻存袋放在第三温度的环境下保持第三时长的步骤之中，转移温度不高于T2；
在将冻存袋放在第四温度的环境下保存的步骤之中，转移温度不高于T3。
6.如权利要求5所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在步骤S1之中，采用吸头多次吹打实现将脐带血造血干细胞、右旋糖酐和DMSO混匀形成混合溶液。
7.如权利要求6所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在将冻存袋放在第一温度的环境下保持第一时长的步骤中，采用第一保温箱对冻存袋进行持续保温；
在将冻存袋放在第二温度的环境下保持第二时长的步骤之中，采用第二保温箱对冻存袋进行持续保温；
在将冻存袋放在第三温度的环境下保持第三时长的步骤之中，采用第三保温箱对冻存袋进行持续保温。
8.如权利要求7所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在步骤S6之后，还包括对冻存袋中脐带血干细胞进行复苏的步骤，具体地，将冻存袋置于37℃水浴2分钟进行复苏。
9.如权利要求8所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在将冻存袋置于37℃水浴2分钟进行复苏的步骤之后，还包括对脐带血干细胞测定活率。
10.如权利要求9所述的脐带血造血干细胞冻存方法，其特征在于：在步骤S6之中，将冻存袋放在第四温度的环境下保存，保存时长T0≥1个月。
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