[发明专利]一种布鲁氏菌病保护菌株及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种布鲁氏菌病保护菌株，所述菌株是由S型羊种布鲁氏菌Rev.1随机突变缺失基因获得的或缺失wadC基因获得的。本发明诱导S型羊种布鲁氏菌Rev.1随机突变缺失基因获得具有良好遗传稳定性的粗糙(R)型布鲁氏菌RM227；采用同源重组缺失技术从S型羊种布鲁氏菌Rev.1获得了缺少wadC基因、具有良好遗传稳定性的光滑(S)型布鲁氏菌Rev.1‑ΔwadC。本发明还提供一种布鲁氏菌病RS双价疫苗，包含一定浓度配比的粗糙(R)型布鲁氏菌RM227和光滑(S)型布鲁氏菌Rev.1‑ΔwadC，免疫小鼠实验证明，本发明RS双价疫苗既具有较好的免疫保护和安全性，又可以实现自然感染抗体与免疫所涉及的脂多糖(LPS)抗体的鉴别诊断。

技术领域

本发明涉及布鲁氏菌病保护菌株技术领域，尤其涉及一种布鲁氏菌病保护 菌株及其制备方法与应用。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病，是由布鲁氏菌细菌引起的以感染家 畜为主的人畜共患传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为多种动物疫病， 我国将其列为二类动物疫病。

我国与人类布病有关的传染源主要是患病羊、牛。感染动物可从乳汁、粪 便和尿液中排出病原菌，长期或终身带菌，当患病母畜流产时，大量病菌随着 流产胎儿、胎衣和子宫分泌物一起排出，成为最危险的传染源。

布病疫苗是实施控制动物布病的重要手段。

我国现有的动物布病疫苗有：猪、牛、羊均可使用的布鲁氏菌活菌苗(S2 株)，主要用于羊的布鲁氏菌活菌苗(M5株)，以及从国外引进用于牛的布鲁 氏菌活疫苗(A19株)。其中，S2株应用最为广泛，据2011-2013年中国兽医 药品监察所生物制品产品批签发的统计数据，我国每年使用S2株疫苗达1.5 亿头份以上，占动物布病疫苗的98％以上。

国际上，目前在使用的动物布病疫苗有：用于羊的布鲁氏菌活菌苗(Rev.1 株)，用于牛的布鲁氏菌活疫苗(A19株)及极少数地方在使用的布鲁氏菌活 疫苗(RB51株)。

根据菌株表型的不同，布鲁氏菌病疫苗可分为光滑(Smooth，S)型疫苗 和粗糙(Rough，R)型疫苗。普遍使用的为S型疫苗，但历史上曾经短暂使用 过R型灭活疫苗45/20，上世纪90年代，美国批准了另一种R型布鲁氏菌病活 疫苗RB51，但至今只有极少数地方使用。

S型活疫苗有较好的免疫效果，但免疫抗体会干扰对野毒感染的抗体诊断， 并且存在一定的安全性问题；R型活疫苗能区分感染与免疫的涉及LPS抗体的 诊断且安全性有所提高，但是其免疫保护弱于S型活疫苗。

本发明通过用诱变剂诱变S型羊种布鲁氏菌Rev.1获得粗糙(R)型布鲁 氏菌RM227，通过同源重组由S型羊种布鲁氏菌Rev.1获得光滑(S)型布鲁 氏菌Rev.1-ΔwadC，两种菌株经优选配比，制备成布鲁氏菌病RS双价疫苗，本 发明的RS双价疫苗既具有S型布鲁氏菌病活疫苗的良好免疫保护力，又兼具 R型布鲁氏菌病活疫苗能区分自然感染抗体与免疫所涉及的脂多糖(LPS)抗 体的诊断，还具有与R型布鲁氏菌病活疫苗近似的安全性，为预防布鲁氏菌病 提供一种新型疫苗。

发明内容

本发明公开一种布鲁氏菌病保护菌株，所述菌株是由S型羊种布鲁氏菌 Rev.1随机突变缺失基因获得的或缺失wadC基因获得的。

所述S型羊种布鲁氏菌Rev.1随机突变缺失基因采用诱导突变技术获得菌 株，获得的菌株命名为粗糙(R)型布鲁氏菌RM227于2020年5月12日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC NO.19808。

所述粗糙(R)型布鲁氏菌RM227的制备方法为：取诱导剂加入TSB培养 基中配制成R型布鲁氏菌诱变培养基，接种被诱变S型羊种布鲁氏菌Rev.1菌 株，37℃恒温摇床培养3天，倍比稀释涂板，培养单菌落，用布鲁氏菌菌落结 晶紫染色法初选R型菌落，再经表型鉴定，获得的R型布鲁氏菌，命名为布鲁 氏菌RM227。