[发明专利]屈公病毒及兹卡病毒的多重检测试剂盒及方法

说明书

屈公病毒及兹卡病毒的多重检测试剂盒包括对屈公病毒具特异性的第一引物组及对兹卡病毒具特异性的第二引物组。第一引物组包括具SEQ ID NO:1序列的正向引物及具SEQ ID NO:2序列的反向引物。第二引物组包括具SEQ ID NO:4序列的正向引物、具SEQ ID NO:5序列的正向引物、及具SEQ ID NO:6序列的反向引物。试剂盒也包括对屈公病毒具特异性且具SEQ ID NO:3序列的探针，及对兹卡病毒具特异性且具SEQ ID NO:7序列的探针。试剂盒更包括由软腐细菌之proA基因体外转录所得RNA之内部对照模板、具SEQ ID NO:8序列的正向引物、具SEQ ID NO:9序列的反向引物、及具SEQ ID NO:10序列的探针。

【技术领域】

本案系关于屈公病毒及兹卡病毒的多重检测，尤指用于屈公病毒及兹卡病毒多重检测的试剂盒及方法。

【现有技术】

屈公病毒(Chikungunya virus，CHIKV)是一种虫媒病毒，分类学上属于阿尔发病毒(Alphavirus)属、披衣病毒(Togaviridae)科。此病毒经由携带病毒的斑蚊(Aedesmosquitoes)的叮咬而在人与人之间传播。此病毒于1953年首次从血清和斑蚊中分离出来。

屈公病通常发生在非洲及亚洲，然由于气候变化及全球化现象，在欧洲及美洲也爆发了疫情。此疾病的症状从无症状到极度病态。屈公病通常始于高达40℃的急性发热期，且持续数天至一周，接着是长期的关节疾病，会影响四肢的关节，且由关节的屈公病毒感染引起的疼痛会持续数周或数月。据信「屈公」一词源自非洲当地方言(马康德语「弯曲」)，描述患者因此病遭受极度关节痛而扭曲的姿势。其他非特异性症状可能包括头痛、结膜炎、消化系统不适、和轻微的畏光。

兹卡病毒(Zika virus)是一种经由蚊子传播的黄病毒，于1947年在乌干达首次于猴子中发现，之后于1952年在乌干达和坦桑尼亚联合共和国于人类中发现。此病毒经由携带病毒的斑蚊(Aedes mosquitoes)的叮咬而在人与人之间传播。

在2015年之前，兹卡病毒爆发通常发生在非洲，东南亚及太平洋岛屿。然而，由于全球化现象，2015年3月发生了最严重的疫情，从巴西开始爆发，不久便蔓延到了美洲、非洲、亚洲和欧洲。此疾病的症状从无症状到轻度症状，例如发烧、皮疹、头痛、关节痛、以及结膜炎和肌肉痛。通常，轻度症状会持续几天到一周，且感染者甚至可能没有意识到自己已被感染。然而，根据最近的发现，兹卡病毒感染可引起神经系统疾病，例如格林-巴利症候群(Guillain-Barrésyndrome)，以及称为先天性兹卡症候群(congenital Zika syndrome)的严重先天性缺陷，其在感染母亲的新生儿中，最明显的症状就是会有严重的小头畸形。

目前常用于这些病毒诊断的三种技术为病毒分离(针对兹卡病毒)、血清学检测、和实时逆转录聚合酶链锁反应(real-time reverse transcription polymerase chainreaction，real-time RT-PCR)，这些技术分别通过病毒检测、对病毒具特异性的抗体检测、以及病毒RNA检测来确认病毒的感染。病毒分离须在细胞培养中使用活病毒，且观察由病毒引起的细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)，再利用对屈公病毒具特异性的抗血清来中和CPE，以确认CPE。此诊断方法的主要缺点是必须在3级生物安全实验室中进行，且需要1-2周才能完成检测。血清学检测虽然可以在15分钟到2-3天内提供确定结果，但此方法涉及检测病人血清中的IgM及IgG抗体，而这些抗体仅在临床症状(例如发烧)发生几天后才出现。另外，由于会有其他虫媒病毒与IgM发生交叉反应而产生假阳性的可能性，特别是如果病人先前有其他黄病毒的感染史，使得血清学检测的特异性仍受到质疑。实时逆转录聚合酶链锁反应是一种较新的诊断法，可解决上述方法的缺点。由于具有较高的灵敏度，实时逆转录聚合酶链锁反应可以更快速地检测屈公病毒基因组及兹卡病毒基因组，即使在感染初期也是如此，且由于具有较高的特异性，假阳性的可能性也较低。