[发明专利]一种促脑胶质瘤耐药的gaMSCs亚群的检测方法

说明书

本发明公开了提出一种促脑胶质瘤耐药的脑胶质细胞瘤相关间充质干细胞（gaMSCs）亚群的检测方法。本发明通过收集gaMSCs条件培养液培养的人胶质瘤细胞系U87及胶质瘤原代细胞（GBM‑1）并使用TMZ处理，再进行多种检测手段实现直观实验比对，来进行gaMSCs对脑胶质瘤化疗耐药性的评价。本发明的评价方法可以得出CD90低表达的gaMSCs亚群可通过分泌IL‑6促进脑胶质瘤细胞中FOXS1的表达，从而激活肿瘤细胞的上皮间充质转化(EMT)进程，形成对替莫唑胺的化疗耐药。本发明进一步明确了脑胶质瘤微环境促使肿瘤细胞化疗耐药的机制，同时为进一步针对脑胶质瘤的个性化治疗提供了新的思路和靶点。

技术领域

本发明涉及生物及医学技术领域，具体涉及一种促脑胶质瘤耐药的gaMSCs亚群的检测方法。

背景技术

恶性胶质瘤是在成人中最常见的具有极强侵袭性的高度恶性的原发脑肿瘤，病死率极高。尽管进行手术切除，并辅以放化疗，但其中位生存期仍只有13-16个月，五年生存率仅为6.7%。虽然一些新型治疗方法如免疫检查点抑制剂，病毒疗法，CAR T，树突3状细胞疗法和疫苗治疗已经显现出对恶性胶质瘤有一定作用，但仍需要进一步研究。目前替莫唑胺（TMZ）化疗仍是主要的治疗方法，且替莫唑胺疗法是唯一被批准用于新诊断的恶性胶质瘤的化学疗法。替莫唑胺是一种口服烷化化疗药物，可以有效地穿过血脑屏障作用于病变部位，延长术后患者的生存期。但随着用药时间的延长，大多数患者会显现出对替莫唑胺的耐药性。

肿瘤细胞对化疗药物治疗是否敏感，不仅取决于其基因是否发生突变，还会很大程度上受到周围环境的影响，而且本身肿瘤细胞的耐药变异也会一定程度受周围环境影响。肿瘤微环境（TMZ）是由多种细胞外成分如细胞外基质，各种激素，细胞因子，生长因子，内皮细胞，干细胞（包括间充质干细胞），免疫细胞，成纤维细胞等构成。肿瘤微环境对于肿瘤的发生发展具有重要作用，近年来相关研究也在逐渐增多，其地位也越来约重要。肿瘤微环境不仅可以利于所包含的各种类型细胞及各种细胞外成分促进肿瘤的发生，进展和转移并维持肿瘤的表征，还很有可能对化疗耐药性的形成具有重要作用。

间充质干细胞（MCS）也称为多能性间充质干细胞，在体外形态与成纤维细胞类似，在特定刺激条件下可以增殖分化为成骨细胞，软骨细胞，脂肪细胞多种细胞系。在肿瘤中，其相关的间充质干细胞是肿瘤微环境中干细胞的重要组成部分，脑胶质瘤相关间充质干细胞（gaMSCs）在肿瘤进展中可向周细胞转化，参与血管生成，并对胶质瘤的进展中起到较明显的作用。

但是，目前并没有关于gaMSCs对胶质瘤替莫唑胺耐药形成机制的研究，继而本发明提供一种gaMSCs对脑胶质瘤化疗耐药性的评价方法。

发明内容

本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提出一种促脑胶质瘤耐药的gaMSCs亚群的检测方法，直观、真实的进行gaMSCs对脑胶质瘤化疗耐药性影响的分析评价。

本发明提出一种一种促脑胶质瘤耐药的gaMSC亚群的检测方法，包括以下步骤：

S1：收集并分离得到gaMSCs、人胶质瘤细胞系U87和胶质瘤原代细胞（GBM-1）；

S2：分别制备由DMEM 培养基和gaMSCs条件培养液培养的人胶质瘤细胞系U87和胶质瘤原代细胞（GBM-1），即得到DMEM 培养基培养的人胶质瘤细胞系U87（Control-U87）、DMEM 培养基培养的胶质瘤原代细胞（Control-GBM1）、gaMSCs条件培养液培养的人胶质瘤细胞系U87（gaMSC-U87）和gaMSCs条件培养液培养的胶质瘤原代细胞（gaMSC-GBM1）；

S3：将Control-U87、Control-GBM1、gaMSC-U87和gaMSC-GBM1进行胶质瘤化疗药物体外加药处理，得到多个待测样品；

S4：通过CCK-8进行加药待测样品增殖能力的检测分析比对；