[发明专利]大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因及其编码蛋白和应用

说明书

大豆孢囊线虫Hg‑flp‑1基因及其编码蛋白和应用，涉及一种大豆孢囊线虫神经肽基因及其编码蛋白和应用。是要解决现有大豆孢囊线虫的化学防治方法存在环境污染的问题。该基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。编码蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。本发明神经肽基因Hg‑flp‑1，经过dsRNA处理后，侵染根内的二龄幼虫数量及侵染21天后根表雌虫数量分别下降25％和28.9％。本发明大豆孢囊线虫Hg‑flp‑1基因应用于大豆孢囊线虫防治领域。

技术领域

本发明涉及一种大豆孢囊线虫神经肽基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

大豆是重要的粮食和油料作物，也是植物蛋白的主要来源，大豆的品质和产量对我国的农业经济发展至关重要。大豆孢囊线虫病是制约大豆品质和产量的重要因素之一，我国生产大豆的地方都有该病的发生。大豆孢囊线虫属于植物内寄生线虫，主要寄生于豆科，SCN经由寄主植物的根系侵入，造成寄主根部发育迟缓，根瘤减少，严重时导致绝产；此外，大豆孢囊线虫侵染还会加剧大豆疫霉、大豆茎褐腐病的发病程度(Sugawara,1997；Kaitany,2000；Tabor,2003)。当前对大豆孢囊线虫的防治以化学防治法为主，但该方法存在环境污染的问题；轮作及抗性育种的应用又受到轮作品种和顺序，育种年限长等限制。因此，挖掘大豆孢囊线虫的新基因，解析其在大豆孢囊线虫的运动、识别寄主、侵染和发育过程中的作用，以其作为新的靶标开发高效、广谱的新型环境友好型杀线药物，具有重要的理论指导意义和实际应用价值。

发明内容

本发明是要解决现有大豆孢囊线虫的化学防治方法存在环境污染的问题，提供大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因及其编码蛋白和应用。

本发明提供大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

本发明的另一目的是提供大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因的编码蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。

进一步的，根据所述大豆孢囊线虫的Hg-flp-1基因设计合成的dsRNA片段，如序列表中SEQ ID NO：3所示。

本发明还提供大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因在防治大豆孢囊线虫中的应用。

进一步的，所述防治大豆孢囊线虫的方法为：根据大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因设计合成dsRNA片段；将dsRNA片段摄取到大豆孢囊线虫体内。

本发明的有益效果：

提供一种来源于大豆孢囊线虫的Hg-flp-1基因，与大豆孢囊线虫的侵染寄主有关，该基因在线虫的腹神经索表达，在大豆孢囊线虫的寄生期二龄幼虫和雄虫中表达较高。实验显示该基因参与大豆孢囊线虫侵染寄主过程的调节，可作为大豆孢囊线虫防治药物开发的靶标基因。

本发明针对Hg-flp-1基因序列，筛选特定的功能区域合成dsRNA，通过体外干扰的方法测定dsRNA处理对线虫侵染能力以及雌虫指数的影响，验证Hg-flp-1在线虫寄生过程中的作用。本发明神经肽基因Hg-flp-1，经过dsRNA处理后，侵染根内的二龄幼虫数量及侵染21天后根表雌虫数量分别下降25％和28.9％，结果表明该基因在大豆孢囊线虫侵染及发育过程中具有重要作用，可以作为杀线药物开发的靶标基因。

本发明对于大豆孢囊线虫致病机制的研究以及线虫防治具有重大价值。

附图说明

图1为RT-PCR克隆大豆孢囊线虫Hg-flp-1基因；

图2为原位杂交显示Hg-flp-1在SCN神经细胞的定位；其中s：口针；mb：中食道球；vg：腹神经索；

图3为外源dsRNA处理对二龄幼虫中Hg-flp-1表达量的影响；

图4为幼虫接种48h后大豆根内的二龄幼虫数目；