[发明专利]用于COVID-19、FluA、FluB病毒检测的冻干PCR试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于COVID‑19、FluA、FluB病毒检测的冻干PCR试剂及其制备方法，该冻干PCR试剂根据COVID‑19病毒、FluA病毒、FluB病毒的特异性基因序列设计三种不同的上游引物、下游引物、TaqMan探针，使得冻干PCR试剂能够针对已经有发热症状的患者，同时检测COVID‑19、FluA、FluB三种病原体，判断可致发热症状的病原体是否为COVID‑19、FluA、FluB中的一种或多种，该试剂中含有尿嘧啶‑DNA糖基化酶防污染体系，并以dUTP替代dTTP作为PCR原料，在进行PCR扩增时，尿嘧啶‑DNA糖基化酶能消化PCR产物中含U的PCR产物，进而防止PCR产物气溶胶污染，保证冻干剂型的PCR试剂检测效果。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种用于COVID-19、FluA、FluB 病毒检测的冻干PCR试剂及其制备方法。

背景技术

世界卫生组织将新型冠状病毒命名为COVID-19，COVID-19感染患者以发热、 咳嗽、疲乏、无力为主要症状，该症状与甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病 毒(FluB)感染症状具有类似之处，此外，与2003年爆发的SARS病毒(非典 型肺炎病毒)不同，COVID-19具有更强传染性，而且有可能与FluA类似，长期 存在并季节性爆发。

现有核酸检测产品中多以COVID-19单种病毒检测产品为主，可以以较低成 本对人群进行大规模的COVID-19筛查，但无法检测出因为FluA和FluB病原体 造成的发热症状，使得试剂盒的适用范围降低；现有核酸检测产品基本为液体 剂型，液体剂型试剂在运输过程中需要进行冷链运输，冷链运输使得试剂在运 输过程的成本提升，且在储存过程中需冷藏大大提升了储存成本，并在储运过 程中试剂失效的风险较高；现有核酸检测产品在检测PCR产物时，易被PCR产 物气溶胶污染。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于COVID-19、FluA、FluB病毒检测的冻干PCR 试剂及其制备方法。

本发明要解决的技术问题：

现有核酸检测产品中多以COVID-19单种病毒检测产品为主，可以以较低成 本对人群进行大规模的COVID-19筛查，但无法检测出因为FluA和FluB病原体 造成的发热症状，使得试剂盒的适用范围降低；

现有核酸检测产品基本为液体剂型，液体剂型试剂在运输过程中需要进行 冷链运输，冷链运输使得试剂在运输过程的成本提升，且在储存过程中需冷藏 大大提升了储存成本，并在储运过程中试剂失效的风险较高；

现有核酸检测产品在检测PCR产物时，易被PCR产物气溶胶污染。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

用于COVID-19、FluA、FluB病毒检测的冻干PCR试剂，包括TaqDNA聚合 酶1-20单位、逆转录酶20-200单位、尿嘧啶-DNA糖基化酶0.1-1单位、核糖 核酸酶抑制剂1-40单位、上游引物1-20pmol、下游引物1-20pmol、TaqMan探 针0.5-10pmol、dATP2.5-100nmol、dCTP2.5-100nmol、dGTP2.5-100nmol、 dUTP2.5-100nmol、镁离子0.01-0.2μmol、Tris0.25-2.5μmol、钾离子0.25-5 μmol、冻干保护剂2-15％(m/v)；

该冻干PCR试剂的制备步骤如下：

步骤S1：将上述试剂进行混合，混合均匀后，调节混合液pH值为8.3-8.9， 制得PCR试剂；

步骤S2：将步骤S1制得的PCR试剂加入PCR管中，在不盖盖的条件下放入 冻干机中，进行冻干反应后，在氮气环境下封装冻干PCR试剂；

步骤S3：将待测样品进行核酸提取，得到核酸溶液；