[发明专利]食管癌基因甲基化检测引物探针组合及其试剂盒与应用有效
| 申请号： | 202010561492.7 | 申请日： | 2020-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN111534600B | 公开（公告）日： | 2023-07-21 |
| 发明（设计）人： | 邵琦;张艳桥 | 申请（专利权）人： | 广州达健生物科技有限公司;安徽达健医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 陈欢 |
| 地址： | 510000 广东省广州市黄埔区国际生物岛螺旋大道*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 食管癌 基因 甲基化 检测 引物 探针 组合 及其 试剂盒 应用 | ||
1.一种食管癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，包括以下1)和2)所示的核酸序列组合：
1)DACH1甲基化检测的PCR引物及探针，包括引物探针组合1、引物探针组合3中的一种，其中所述引物探针组合1包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物、如SEQ ID NO.2所示的下游引物以及如SEQ ID NO.3所示的荧光探针，所述引物探针组合3包括如SEQ ID NO.7所示的上游引物、如SEQ ID NO.8所示的下游引物以及如SEQ ID NO.9所示的荧光探针；
2)ZNF132甲基化检测的PCR引物及探针，包括引物探针组合5、引物探针组合6中的一种，其中所述引物探针组合5包括如SEQ ID NO.13所示的上游引物、如SEQ ID NO.14所示的下游引物以及如SEQ ID NO.15所示的荧光探针，所述引物探针组合6包括如SEQ ID NO.16所示的上游引物、如SEQ ID NO.17所示的下游引物以及如SEQ ID NO.18所示的荧光探针。
2. 如权利要求1所述的食管癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，还包括检测内参基因GAPDH的PCR引物及探针，其中，所述引物包括如SEQ ID NO.19所示的上游引物、如SEQ ID NO.20所示的下游引物，所述探针包括如SEQ ID NO.21所示的荧光探针。
3.如权利要求1或权利要求2所述的食管癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的5’端包含有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括FAM、HEX、NED、ROX、TET、JOE、TAMRA、CY3、CY5中的任意一种。
4.如权利要求1或权利要求2所述的食管癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的3’端包含有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团包括MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3中的任意一种。
5.一种食管癌基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的PCR引物探针组合，还包括阳性质控品以及阴性质控品。
6.如权利要求5所述的食管癌基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述食管癌基因甲基化检测试剂盒反应体系的终浓度组成包括：0.1-1μM PCR引物、0.1-1μM探针。
7. 如权利要求5所述的食管癌基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的数字PCR反应条件如下：1）95℃ 2分钟；2）94℃ 30秒，54-60℃ 60秒，循环30-50次；3）98℃ 10分钟；4）冷却至4℃。
8.权利要求1所述的食管癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合在制备检测食管癌试剂盒中的应用。
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