[发明专利]一种基于流式细胞术的吞噬细胞功能检测方法

说明书

本发明公开了一种基于流式细胞术的吞噬细胞功能检测方法，本发明方法将大肠杆菌菌液与噻唑橙染色液于恒温摇床振荡孵育适当时间，用PBS洗去非特异性黏附，离心，弃上清。最后加入适量PBS重悬，加入到吞噬细胞培养液中，于培养箱中培养适当时间。消化收集吞噬细胞，在流式细胞仪上定量分析荧光群体的细胞分布，从而分析吞噬细胞捕获吞噬细菌的功能。本发明快速、准确、简单易行且成本较低，有利于推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于流式细胞术评价吞噬细胞吞噬细菌能力的方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

吞噬细胞为体内具有吞噬功能的一群细胞，主要包括单核吞噬细胞系统和中性粒细胞。单核吞噬细胞系统包括游离于血液中的单核细胞及进入各种组织后发育而成的巨噬细胞。其中巨噬细胞具有很强的吞噬能力，还是一类主要的抗原递呈细胞，在特异性免疫应答的诱导与调节中起关键作用。中性粒细胞是一类小吞噬细胞，具有非特异性免疫防御作用并参与机体的免疫应答、炎症损伤等。吞噬细胞对体内衰老死亡细胞残片和外来异物有吞噬和消化的功能，是机体天然防御的重要机制之一。吞噬细胞的吞噬作用是微生物学与免疫学中的重要实验，它主要用于观察中性粒细胞、巨噬细胞吞噬外来微生物和其它颗粒的能力，从而反映机体的自然免疫防御功能。当病原体穿透皮肤或粘膜到达体内组织后，吞噬细胞首先从毛细血管中逸出，聚集到病原体所在部位。吞噬细胞首先将异物吸附在细胞表面，随之吸附区的胞膜内陷，伸出伪足包围异物并吞入胞质，形成吞噬泡。细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，杀死病原体，消化分解异物。因此，检测吞噬细胞吞噬细菌的功能，对于进一步探究吞噬细胞在机体中发挥的作用以及机体免疫水平的高低具有重要的意义。

小鼠作为最常用的实验动物已经广泛应用于食品、化妆品、药品、生物制品、工业产品和医学及生命科学等的安全性、毒性和效力等方面的实验和检验。传统用于评价小鼠吞噬细胞吞噬功能的方法主要为细胞涂片镜检进行人工计数，这种方法费时、工作量大，受人的主观因素影响比较大，观察的数量较少，一般只能计数100个细胞，所以存在一定的误差。

目前，用流式细胞仪来分析评价吞噬细胞吞噬功能越来越受到人们的关注。由于流式细胞仪检测速度可达每秒2000个细胞，共计数10,000个细胞，极大提高了检测的准确性，并为样本数量较多的实验设计提供了一个快速、准确、可行的实验方法。目前有关吞噬细胞吞噬功能的检测报道不多，有报道使用碳酸盐缓冲液制备的荧光素FITC标记的细菌进行吞噬细胞吞噬功能检测，但该方法存在FITC荧光性弱、难以区分检测的缺点，不利于推广使用。

发明内容

基于上述背景技术中记载的内容，本发明目的在于提供一种优化的流式细胞术评价吞噬细胞功能的方法，进一步提高吞噬细胞功能检测准确性。

基于上述技术目的，本发明提供以下技术方案；

本发明第一方面，提供一种基于流式细胞术的吞噬细胞功能检测方法，所述方法包括以下步骤：将荧光染料标记的细菌加入吞噬细胞中孵育一段时间后通过流式细胞仪分析荧光分布情况从而评价吞噬细胞的吞噬能力。

在发明人的研究过程中，由于荧光染料与细菌结合后被吞噬细胞吞噬，通过流式细胞术检测吞噬细胞中荧光分布时，染料由于被细胞结构遮挡存在亮度不足及难以区分的缺点。根据发明人的研究结果，当采用噻吩橙作为荧光染料应用于上述检测方法，能够清晰完成的显示吞噬细胞吞噬细菌的状况。

以上一个或多个技术方案的有益效果是：

1.本发明采用噻唑橙对细菌进行荧光标记，有效避免了其他染料荧光性弱、难以区分检测的缺点。