[发明专利]一种多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A的分析方法

说明书

本发明提供了一种检测多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A含量的方法，该方法采用亲水基色谱柱，以含有庚烷磺酸钠和磷酸二氢钾，pH为1.7到9.0的水溶液作为流动相A，甲醇作为流动相B，采用阶段性梯度洗脱方法对多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A的含量进行分离测定。该方法分离效果好，操作简单，回收率高，方法灵敏度高，线性范围宽，在制剂制备过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

技术领域

本发明属于药物分析检测领域，具体涉及一种HPLC检测多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A(2RS)-2-氨基-3-羟丙酰肼的分析方法。

背景技术

原研公司Roche Holding AG制备的多巴丝肼复方片剂，商品名为Madopar(美多巴)，由左旋多巴及盐酸苄丝肼组成，是治疗帕金森或帕金森综合症(脑炎后、动脉硬化性或中毒性)的药物。此药能增加多巴胺在脑部细胞的含量，改善帕金森症状。同时苄丝肼可以阻止多巴脱羧酶在左旋多巴未进入大脑内之前被转化成多巴胺，藉此增加脑内多巴胺，增强其疗效并减少其外周不良反应。多巴丝肼复方制剂作为治疗帕金森病或帕金森综合症的一线药物，临床实践显示可获得良好的疗效，与大剂量的左旋多巴效果一样，且耐受性则要好得多。长期服用，帕金森综合症的症状均有显著好转。多巴丝肼结构式如下所示：

但是，在对多巴丝肼复方制剂稳定性及杂质分析研究时发现，盐酸苄丝肼对光和湿都不稳定，会产生3个主要降解杂质，即苄丝肼杂质A：(2RS)-2-氨基-3-羟丙酰肼、苄丝肼杂质B：(2RS)-2-氨基-3-羟基-N,N-二(2,3,4-三羟基苄基)丙烷酰肼、苄丝肼杂质C：(2RS)-2-氨基-3-羟基-N'-[(EZ)-(2,3,4-三羟基苯基)亚甲基]丙酰肼，并有增长趋势。

然而，现有的HPLC检测多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A的方法，使用普通的C18等液相色谱柱，这些方法低浓度灵敏度小，响应小，辅料干扰大，导致准确度低，回收率不符合要求，且在后续样品检测过程中发现苄丝肼杂质A含量检测偏低，从而造成质量问题。因此，为了更好地控制多巴丝肼复方制剂的产品质量，严格控制苄丝肼杂质A的含量，需要开发一个合适的方法提高检测能力。

发明内容

本发明提供了一种检测多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A含量的方法，该方法专属性高，耐用性好、干扰杂质少，为多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质A质量控制及临床的用药安全提供参考。

该方法包括以下步骤：

(1)色谱条件如下：

色谱柱：选自三官能团C18烷基键合硅胶或B型超高纯全多孔球形硅胶填充的亲水基色谱柱；

柱温：30℃；

流动相A：庚烷磺酸钠和磷酸二氢钾至水中溶解，并用氢氧化钠或磷酸调pH至2.0到7.0；

流动相B：甲醇；

检测波长：210nm；

流速：1.0mL/min；

洗脱方式：梯度洗脱；

(2)供试品溶液制备：将多巴丝肼复方制剂溶解于稀释液中以制备供试品溶液；

(3)测定方法：将步骤(2)中制备得到的供试品溶液注入液相色谱仪，并按照所述步骤(1)中的色谱条件对供试品溶液进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

进一步的所述步骤(1)中流动相A中的庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾和水的比例为1～3g:5～7g:1L，优选2.2g:6.8g:1L。

进一步的所述步骤(1)中洗脱方式是先用流动相A洗脱10～20min，然后用流动相A和流动相B梯度洗脱15～30min。