[发明专利]猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗，其特征在于：所述三联疫苗包括抗原组分和冻干保护剂，其中抗原组分包括猫杯状病毒BJ株灭活抗原、猫传染性鼻气管炎病毒SH株灭活抗原和猫泛白细胞减少症病毒SY株灭活抗原；

所述猫杯状病毒BJ株灭活抗原由猫杯状病毒BJ株制备，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202002，分类命名为：猫杯状病毒BJ株，保藏日期为：2020年6月10日，保藏单位地址为：中国.武汉.武汉大学；

所述猫传染性鼻气管炎病毒SH株灭活抗原由猫传染性鼻气管炎病毒SH株制备，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202003，分类命名为：猫传染性鼻气管炎病毒SH株，保藏日期为：2020年6月10日，保藏单位地址为：中国.武汉.武汉大学；

所述猫泛白细胞减少症病毒SY株灭活抗原由猫泛白细胞减少症病毒SY株制备，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202004，分类命名为：猫泛白细胞减少症病毒SY株，保藏日期为：2020年6月10日，保藏单位地址为：中国.武汉.武汉大学。

2.权利要求1所述的猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）分别将猫杯状病毒BJ株、猫传染性鼻气管炎病毒SH株和猫泛白细胞减少症病毒SY株接种于悬浮F81S细胞培养液中，培养一段时间后，分别收集三种毒株的毒液即为三种毒株的抗原液；

（2）将步骤（1）的三种毒株的抗原液中分别加入灭活剂灭活后，再等比例混匀得混匀液，再加入冻干保护剂冷冻真空干燥即得猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗。

3.根据权利要求2所述的猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗的制备方法，其特征在，所述步骤（1）中的悬浮F81S细胞的培养方法为：

① 将全悬浮F81S细胞接种于含有2%血清悬浮培养液的专用悬浮培养摇瓶中，在36.5-37.5℃培养60-72h进行扩增，细胞培养液细胞密度不低于5×10⁵个/mL，且细胞活力≥90%，按照1:（3-5）的比例传代放大培养，得F81S细胞悬浮液；

② 将步骤①培养得到的F81S细胞悬浮液接种入生物反应器中，接种体积为1-2L，补加2%血清悬浮培养液至5L，培养72-96h后的细胞培养液细胞密度不低于2×10⁶个/mL，且细胞活力≥90%；

③ 取步骤②得到的细胞培养液3.5L转移至生物反应器中，补加含2%血清悬浮培养液至10L，继续培养72-96h后，细胞培养液细胞密度不低于2×10⁶个/mL，且细胞活力≥90%，即得到可用作接毒的悬浮F81S细胞培养液。

4.根据权利要求2所述的猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中猫杯状病毒BJ株的接毒量为悬浮F81S细胞培养液体积的2-5%，猫传染性鼻气管炎病毒SH株的接毒量为悬浮F81S细胞培养液体积的2-5%，猫泛白细胞减少症病毒SY株的接毒量为悬浮F81S细胞培养液体积的5-15%；猫杯状病毒BJ株、猫传染性鼻气管炎病毒SH株和猫泛白细胞减少症病毒SY株的培养时间分别为24-48小时、24-48小时和72-96小时，当细胞活率﹤30%时收获病毒液，收获的毒液于-20℃以下保存。

5.根据权利要求2所述的猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗的制备方法，其特征在，所述步骤（2）中灭活剂为BEI灭活剂，BEI灭活剂为0.4mol/LBEA和0.4mol/L NaOH以体积比1:1比例混合制备，每种毒株的抗原液中加入灭活剂后毒株的终浓度为3mM，灭活时间为36-40小时。

6.根据权利要求2所述的猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症三联疫苗的制备方法，其特征在，所述步骤（2）中冻干保护剂为脱脂奶粉；混匀液与冻干保护剂的体积比为1:（1-5）。

7.权利要求1所述的三联疫苗在制备联合预防猫杯状病毒病、猫传染性鼻气管炎和猫泛白细胞减少症药物中的应用。