[发明专利]检测血清外泌体RNF144A-AS1的引物、试剂盒及其在胃癌肝转移诊疗中的应用

说明书

本发明涉及检测血清外泌体RNF144A‑AS1的引物、试剂盒及其在胃癌肝转移诊疗中的应用，试剂盒包括血清lncRNA样本的RNA提取试剂、引物、去基因组DNA反应体系、逆转录反应体系、qPCR操作反应体系，本发明公开了lncRNA在胃癌患者及正常人血清外泌体中的表达情况，并用荧光定量PCR检测RNF144A‑AS1。血清外泌体RNF144A‑AS1可用于胃癌肝转移早期诊断，判断疾病进展和预后情况，并可评价胃癌肝转移的治疗效果。

技术领域

本发明涉及检测血清外泌体RNF144A-AS1的引物、试剂盒及其在胃癌肝 转移诊疗中的应用，属于分子诊断技术领域。

背景技术

胃癌易发生肝转移,与肝脏的生物学特点密不可分。肝脏是人体最大的腺器, 受肝门静脉和肝动脉双重血液供应,其中,肝门静脉占80％,肝动脉占20％,消 化道器官的血液均经肝门静脉回流,肝脏具有丰富的血流量。肝毛细血管是多孔 的血窦状结构,具有很强的通透性,且肝窦导管缺乏皮下基底膜,与脑、肺和骨等 其他器官相比,肿瘤细胞更加容易在肝脏发生外渗,所以肝脏是消化道肿瘤转 移最主要的器官。

胃癌、结直肠癌及胰腺癌等均会通过血管转移和淋巴回流等 途径首先转移到肝脏。肝脏丰富的血管系统为肿瘤细胞的生长提供了充足的营 养物质。除了血液循环系统的作用,胃癌细胞也容易与肝窦内皮细胞黏附。肝毛 细血管可使大量的肿瘤细胞阻滞,肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用后,分泌细 胞因子使血管内皮细胞收缩,促进肿瘤细胞侵出血管,以利于肿瘤细胞定植到肝 实质组织中。

目前对胃癌肝转移早期诊断仍是一大难题。已有一些肿瘤分子标志物应用 于临床早期检测和辅助诊断,如癌胚抗原CEA、CA199、CA125、AFP等,但特 异性仍较低。有报道称CD44v6、OPN、YB-1、MAGE-A10等分子可能作为胃癌 肝转移潜在标志物,但仍待进一步验证。因此，发现新的调控胃癌细胞肝转移的 肿瘤相关基因，不但有助于深入了解胃癌肝转移发生发展的分子机制，补充和 完善现有的细胞癌变理论体系，而且有助于鉴定新的胃癌肝转移特异的生物标 志物和药物靶点，为胃癌肝转移的预防、诊断、治疗提供重要的理论依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种检测血清外 泌体RNF144A-AS1的引物、试剂盒及其应用，血清外泌体中的RNF144A-AS1 可用于胃癌肝转移早期诊断，判断疾病进展和预后情况，并可评价胃癌肝转移 的治疗效果。

为解决上述技术问题，本发明提供一种检测血清外泌体RNF144A-AS1的引 物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供一种检测血清外泌体RNF144A-AS1的试剂盒，包括上述的引 物。

进一步地，还包括血清外泌体的RNA提取试剂、逆转录反应体系、qPCR 反应体系。

进一步地，还包括去基因组DNA反应体系。

进一步地，去基因组DNA反应的条件为42℃2min、4℃∞；逆转录反应条 件为37℃15min、85℃5s、4℃∞；qPCR反应条件为阶段1：95℃、30S、1次循 环；阶段2：95℃、5S、40次循环；60℃、31S、40次循环；阶段3：95℃、15S、 1次循环；60℃、60S、1次循环；95℃、15S、1次循环。

本发明还提供上述的引物或试剂盒作为胃癌肝转移诊疗试剂的应用。

进一步地，使用上述的引物或试剂盒检测血清外泌体中的RNF144A-AS1。

进一步地，检测血清外泌体中的RNF144A-AS1的方法，包括：

提取待检血清中外泌体；

从外泌体样本中提取RNA；

从提取的RNA中去除基因组DNA；