[发明专利]一种双水相酶解体系制备核苷酸的方法有效
| 申请号： | 202010565179.0 | 申请日： | 2020-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN111621534B | 公开（公告）日： | 2021-04-02 |
| 发明（设计）人： | 陈晓春;张磊;汤亦文;李梓阳;蔡家栋 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学;南京同凯兆业生物技术有限责任公司 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30;C12N9/22;C12R1/80 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 胡建华 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 双水相酶 解体 制备 核苷酸 方法 | ||
1.一种双水相酶解体系制备核苷酸的方法，其特征在于，在含氯化锌的由聚乙二醇和硫酸铵组成的双水相体系中，以核糖核酸为原料，通过核酸酶P1进行酶解，反应结束后，所得反应液静置分成为双水相，下相为含有核苷酸的液体；
其中，所述的双水相体系中，聚乙二醇的质量百分比为24%；
其中，所述的双水相体系中，硫酸铵的质量百分比为18%；
其中，所述的聚乙二醇的数均分子量为1000-6000。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的双水相体系中，核糖核酸的浓度为1-100 g/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核酸酶P1的用量为0.1-10 L/kg核糖核酸；所述的核酸酶P1的酶活为1000-6000 U/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的双水相体系中，氯化锌的浓度为0.1-10 g/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解的条件为在pH4.0-9.0，40-90℃下酶解2-12 h。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应结束后，将反应液静置分层成双水相；将下相放出，下相放出的液体经超滤膜分离，将所得超滤透过液再经纳滤膜分离，得到截留物；将所得截留物进一步浓缩干燥后，即得核苷酸。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的超滤膜的截留分子量为1000-6000Da；所述的纳滤膜的截留分子量为150-300Da。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，向上相再次加入硫酸铵，使硫酸铵的质量百分比为1-50%，再次形成双水相体系；同时重新加入核糖核酸、核酸酶P1和氯化锌，使各物质的浓度分别为1-100 g/L、0.1-10 L/g核糖核酸、0.1-10 g/L，并在pH4.0-9.0，40-90℃下酶解2-12 h。
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