[发明专利]一种窖泥己酸菌液的制作方法

权利要求书

1.一种窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，以老窖泥为样品，利用RCM培养基对窖泥中产己酸功能菌进行优选，得到己酸高产菌种，具体包括以下步骤：

步骤一：选取窖泥；

步骤二：窖泥水浴热处理；

步骤三：筛选己酸菌；

步骤四：菌种低温厌氧保存；

步骤五：菌种生长规律研究；

步骤六：菌种扩大培养；

步骤七：灌窖养护。

2.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述选取窖泥具体为：对优质窖池黄水线下窖壁泥取样，位于窖壁距离窖底15-20cm处进行多点取样，取样后将窖泥揉和均匀，2-6℃真空密封保存。

3.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述窖泥水浴热处理具体为：

称取一定量的老窖泥，加入装有玻璃珠的无菌水中，连续振荡至样品分散均匀，形成窖泥悬液；吸取窖泥悬液于试管中，75-85℃水浴热处理淘汰非芽孢营养体，水浴过程间歇晃动避免局部受热。

4.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述筛选己酸菌具体为：

取窖泥悬液于装有RCM培养基的三角瓶中，利用液体石蜡封住培养基液面，35℃恒温培养11d，历经11d后培养液产气过程已经停止，观察该培养阶段的产气情况；

选择产气量大的培养液进行转接培养，观察细菌产气情况以及对其进行己酸定性定量分析，优选己酸产量高的复合己酸菌。

5.根据权利要求4所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述转接培养具体为：吸取培养液接种至RCM培养基试管中，用液体石蜡封盖液面，35℃深层恒温培养11d。

6.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌种低温厌氧保存具体为：利用液体石蜡隔绝空气将菌种进行试管深层培养，然后置于2-6℃冰箱冷藏保存。

7.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌种生长规律研究具体为：

采用无菌操作以5％的接种量将菌种转接至RCM培养基中，35℃恒温培养12d；

利用空白培养基作对照，每天检测菌体产气情况、OD600nm值以及菌体数量，以培养时间为横坐标，菌体数量、OD600nm值为纵坐标绘制菌种生长曲线；

根据微生物生长曲线确定最佳接种时间，保证最大的菌体数量与活力，为扩大培养提供依据。

8.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌种扩大培养具体为：

以酿造原料为主的天然培养基对菌种进行逐级扩培，先对培养基在121-126℃进行30-40min高温湿热灭菌处理，待冷却至室温后添加酒头搅拌均匀，以10％接种量进行高液面逐级扩大培养，并用少量酒头封培养基液面，将窖泥己酸菌液扩培，35℃恒温培养5-6d后，菌体数量至9.6×10⁸-10.0×10⁸个/mL。

9.根据权利要求8所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述天然培养基包括5％曲粉，4％酒头，4％豆粕粉，1％窖泥粉，0.5％黄浆水，其余为水。

10.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述灌窖养护具体为：

酿造车间窖池残糟清理完毕后，利用竹签对窖池四壁成30度角打孔，孔径6-10mm，孔深5cm，孔距6-8cm；

将窖泥己酸菌液搅拌均匀，沿窖壁自上而下灌淋，灌淋一遍后稍停片刻，待菌液渗透后再灌淋；

用木质抹板将窖壁抹平，匀撒1.0-1.5kg优质大曲细粉，即可将固体酒醅进行入窖。