[发明专利]工程化异体和免疫抑制耐受性T细胞的方法

权利要求书

1.一种工程化可用于治疗癌症的T细胞的方法，包括：

(a)通过使用能够选择性地灭活至少一种编码CD52的基因的稀切内切核酸酶灭活所述基因的表达，从而改变T细胞，以及

(b)可选地在靶向CD52的免疫抑制剂的存在下，扩增所述细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，包括以下步骤：

(i)提供T细胞；

(ii)向所述T细胞中引入能够通过DNA断裂选择性地灭活编码CD52的基因的至少一种稀切内切核酸酶，

(iii)可选地在靶向CD52的免疫抑制剂的存在下，扩增所述细胞，

从而获得可用于治疗患者的细胞群。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中，在所述免疫抑制剂的存在下，在步骤(b)中扩增T细胞。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述免疫抑制剂是靶向CD52的抗体。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述靶向CD52的抗体是阿仑珠单抗。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法，其中，所述稀切内切核酸酶在步骤(iii)中通过RNA电穿孔的方式引入至所述细胞。

7.根据权利要求2-6中任一项所述的方法，其中，所述稀切内切核酸酶是大范围核酸酶、锌指核酸酶或TALE-核酸酶，优选地TALE-核酸酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述TALE-核酸酶包括融合至大范围核酸酶的TALE结构域，优选地其中，所述大范围核酸酶是I-CreI、I-OnuI或其功能变体。

9.根据权利要求2-8中任一项所述的方法，其中，所述稀切内切核酸酶针对选自SEQ IDNO:40和SEQ ID NO:61至SEQ ID NO:65的CD52的基因靶标序列中的一个。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括通过灭活免疫检查点中涉及的至少一种蛋白质而基因改变所述T细胞，优选地其中所述免疫检查点蛋白质是PDCD1和/或CTLA-4。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，包括向所述T细胞中引入嵌合抗原受体(CAR)。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中的所述T细胞来源于炎性T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞、辅助T淋巴细胞，或者来源于干细胞。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中的所述T细胞来源于CD4+T淋巴细胞和/或CD8+T淋巴细胞。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述T细胞是初级细胞。

15.针对编码CD52的基因的稀切内切核酸酶用于制备药物的用途。

16.根据权利要求15所述的用途，其中，所述针对编码CD52的基因的稀切内切核酸酶针对的是选自SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:61至SEQ ID NO:65的多核苷酸序列。

17.根据权利要求15或权利要求16所述的用途，其中，所述稀切内切核酸酶是大范围核酸酶、锌指核酸酶或TALE-核酸酶，优选地TALE-核酸酶。

18.根据权利要求17所述的用途，其中，所述TALE-核酸酶包括融合至大范围核酸酶的TALE结构域，优选地其中，所述大范围核酸酶是I-CreI、I-OnuI或其功能变体。