[发明专利]一种冻存人PBMC复苏液及复苏方法

权利要求书

1.一种冻存人PBMC复苏液，其特征在于，所述复苏液主要成分包含重组人血白蛋白、转铁蛋白、谷氨酰胺、胰岛素、维生素B、右旋糖酐、氯化钠、氯化钙。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述复苏液主要成分包含有效浓度范围为1-20g/ml的重组人血白蛋白、有效浓度范围为1-10g/ml的转铁蛋白、有效浓度范围为0.2-0.5ug/ml的谷氨酰胺、有效浓度范围为3-10ug/ml的胰岛素、有效浓度范围为0.5-1mg/ml的维生素B、有效浓度范围为0.2-0.5g/ml的右旋糖酐、有效浓度范围为1-10mg/ml氯化钠、有效浓度范围为0.1-0.5mg/ml氯化钙。

3.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述重组人血白蛋白的有效浓度范围为1-20g/ml。

4.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述转铁蛋白的有效浓度范围为1-10g/ml。

5.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述谷氨酰胺的有效浓度范围为0.2～0.5ug/ml。

6.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述胰岛素的有效浓度范围为3～10ug/ml。

7.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述维生素B的有效浓度范围为0.5-1mg/ml。

8.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述右旋糖酐的有效浓度范围为0.2～0.5g/ml。

9.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述氯化钠的有效浓度范围为1-10mg/ml。

10.根据权利要求1所述的复苏液，其特征在于，所述氯化钙的有效浓度范围为0.1-0.5mg/ml。

11.根据权利要求1-10任意一项所述的复苏液，其特征在于，所述复苏液主要成分包含浓度为5g/ml的重组人血白蛋白、浓度为1g/ml的转铁蛋白、浓度为0.365mg/ml的谷氨酰胺、浓度为3.5ug/ml的胰岛素、浓度为0.68mg/ml的维生素B、浓度为0.3g/ml的右旋糖酐、浓度为6.9mg/ml氯化钠、浓度为0.12mg/ml氯化钙。

12.一种利用权利要求1-10任意一项所述的复苏液对冻存人PBMC进行复苏的方法，包括：

1、将待复苏细胞从液氮中取出，并立刻转移到37℃水浴锅内在2分钟内快速溶解；

2、将溶解的细胞混悬液转移到预先准备好装有5倍体积的复苏液的离心管中，常温下，500×g离心10min，弃上清；

3、重悬细胞，用复苏液调整细胞密度为2.0～2.5×10⁶个/ml，放于37℃、5％CO₂的细胞培养箱中孵育60min，常温下，500×g离心10min，收集细胞。