[发明专利]一种蛋鸡卵巢氧化应激模型的建立方法

说明书

本发明公开了一种蛋鸡卵巢氧化应激模型的建立方法，包括以下步骤：选用产蛋高峰期的罗曼粉蛋鸡，采用单因素试验设计，设6个处理，分别为1个对照组和5个叔丁基过氧化氢组，对照组饲喂生理盐水；最后一次饲喂后48h进行采样；试验期为24天，饲粮为玉米‑豆粕型基础饲粮，饲养管理按常规饲养管理进行；记录产蛋率，通过ELISA方法测定雌二醇等的浓度；最后一次饲喂生理盐水和叔丁基过氧化氢后48h收集卵巢，HE染色后，对原始卵泡数量进行统计，并对前等级和等级卵泡计数和量取；利用HPLC和试剂盒方法测定卵巢中维生素C等的含量或活性。本发明的方法能够增加卵巢自由基的含量，降低卵巢抗氧化酶活，导致了蛋鸡氧化应激。

技术领域

本发明属于动物繁殖学和毒理学技术领域，具体地说，涉及一种蛋鸡卵巢氧化应激模型的建立方法。

背景技术

家禽卵巢是研究卵巢生物学、卵泡发育和卵巢癌的经典模型。家禽的产蛋性能主要取决于卵巢中卵泡的生长和发育水平，并受到遗传、营养及环境条件(光照时间和强度)等因素的影响。随着遗传和营养领域技术的进步，商品蛋鸡生产性能持续提高，目前高产蛋鸡110周可产410枚～430枚鸡蛋，但全期(20-110周龄)平均产蛋率只有65％～70％，仍具有一定的生产潜力有待挖掘。在实际生产中，产蛋鸡一般在18-20周时达到性成熟并开产，到24-25周龄产蛋率达95％以上，随后产蛋率缓慢下降，至产蛋后期(45周龄)产蛋率降到88％左右，而后产蛋率下降速度逐渐增快，80周龄下降到60％左右，产蛋间隔延长，卵巢内不同发育阶段的卵泡闭锁数量增加，表明蛋鸡产蛋后期卵巢机能逐步衰退，卵泡发育受到抑制，并容易诱发卵巢癌症。此外，其他应激因素，比如高温，高饲养密度、重金属、疾病等也可以导致产蛋率的急剧下降。生产中因产蛋后期卵巢机能衰退或其他应激等因素，导致全期产蛋数低，一般第一个生产期(72周龄)结束前蛋鸡被淘汰，终生仅提供280～300枚鸡蛋，究其主要原因在于卵泡闭锁数量增多和卵泡质量不佳。本课题组前期研究发现，蛋鸡饲料中添加抗氧化剂(茶多酚提取物)可以改善重金属镉和钒诱导氧化应激模型下蛋鸡的产蛋率和卵泡数，也可以提高产蛋后期的产蛋成绩；前人研究报道也证实氧化应激造成的繁殖性能衰退，可能是蛋鸡后期和应激时产蛋性能下降的主要原因。家禽在孵化时卵巢拥有原始卵泡480万个，但终生排卵仅500～1000个，具有巨大的生产潜力。氧化应激(Oxidativestress)是指机体在遭受各种有害刺激时，体内的活性分子如活性氧(ROS)和活性氮自由基产生过多，氧化程度超出氧化物清除能力，氧化系统和抗氧化系统动态失衡，从而导致组织损伤。ROS是细胞通路的重要调控分子，能调控细胞周期和细胞凋亡。大量的研究表明，卵泡内一定量的ROS对其发育和排卵具有重要的生理作用，然而当ROS过度升高，将会导致氧化应激，诱导卵泡闭锁。哺乳动物上的研究发现，氧化应激能降低卵巢各阶段卵泡数量，但氧化应激抑制卵泡发育，诱导卵泡闭锁的具体机制尚不清楚，仅有的研究主要是在人和小鼠等模式动物上，在家禽上的研究非常少。

因此，鉴于上述原因，为了进一步探究氧化应激造成卵巢功能损伤从而降低产蛋性能的具体机制，有必要建立一种蛋鸡卵巢的氧化应激模型。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种蛋鸡卵巢氧化应激模型的建立方法，能够进一步探究营养和饲料因素以及衰老引起鸡蛋生产性能下降的具体机制。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种蛋鸡卵巢氧化应激模型的建立方法，包括以下步骤：

选用产蛋高峰期即28周龄的罗曼粉蛋鸡，采用单因素试验设计，设6个处理，每个处理10个重复，每个重复1只鸡，分别为1个对照组和5个叔丁基过氧化氢组，对照组饲喂生理盐水，分别于实验8、15、22天早上9：00饲喂生理盐水和叔丁基过氧化氢；最后一次饲喂后48h进行采样；试验期为24天，饲粮为玉米-豆粕型基础饲粮，饲喂方式为定量饲喂；饲养管理按常规饲养管理进行；试验开始预饲2周，前通过观察记录蛋鸡产蛋率，按产蛋率进行随机分组；