[发明专利]瑞德西韦中间体GS-441524的高效液相色谱检测方法

说明书

本发明公开了瑞德西韦中间体GS‑441524的高效液相色谱检测方法，它包括以下步骤：a、配制标准溶液；b、采用反向高效液相色谱对标准溶液进行检测；c、按外标法以峰面积计算样品中GS‑441524的含量。本发明检测方法，可以使GS‑441524和原料及其他杂质在高效液相色谱仪上得到良好的分离；在1.0～20μg/mL内，线性关系良好，R²=0.9997，平均回收率在97.79%~99.90%之间，9次平行试验精密度RSD值为2.65%。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及一种瑞德西韦中间体GS-441524的高效液相色谱检测方法。

背景技术

瑞德西韦（Remdesivir）是一种核苷类似物，是由美国吉利德科学公司开发的一种新型实验性广谱抗病毒药物，能够抑制依赖RNA的RNA合成酶（RdRp），GS-441524是合成瑞德西韦的重要中间体，CAS的登记号为1191237-69-0，分子式为C12H13N5O4，分子量为291.267，英文名为：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-aminopyrrolo[2，1-f][1，2，4]triazin-7-yl)-3，4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-carbonitrile，其化学结构如图1所示，GS-441524既是瑞德西韦的前体化合物，又是瑞德西韦的活性代谢物。

一般情况下，GS-441524中不可避免地会存在杂质化合物，检测其中的杂质化合物对于GS-441524以及瑞德西韦的质量控制具有重要的意义，高效液相色谱可反相、正相分类，由固定相和流动相的相对极性决定；其中反相高效液相色谱：采用相对极性较弱的固定相，以极性更强的溶剂作为流动相，常用于分离检测非极性和极性较弱的化合物，应用广泛；正相高效液相色谱：采用极性固定相，以相对极性较弱的溶剂作为流动相，常用于分离检测极性相对较强的化合物。

无论作为瑞德西韦的中间体还是代谢物，又或是其自身直接作为药物，在分析化学以及药物分析领域，GS-441524的含量都要求被准确测定，目前国内外文献尚未见GS-441524含量测定方法的相关报道，因此，亟需研发一种操作简便、分离度高的图1所示化合物的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供瑞德西韦中间体GS-441524的高效液相色谱检测方法。

本发明提供的瑞德西韦中间体GS-441524的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：

步骤a、配制标准溶液：精密称取0.050g的GS-441524对照品，用甲醇/水（1:9，v/v）溶液溶解，制成浓度为0.2～20μg/mL的溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤，得到标准溶液；

步骤b、采用反相高效液相色谱对标准溶液进行检测，检测条件为：

色谱柱的固定相：表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）的硅胶为填料；

流动相：甲醇和0.2%甲酸水溶液，固定比例1:9（v/v）；

检测波长：230～320nm；

步骤c、按外标法以峰面积计算样品中GS-441524的含量。

进一步的，步骤a中，标准溶液的浓度为0.2～20μg/mL。

进一步的，步骤b中，内径为2.1mm，长度为50～150mm，填料粒径为1.7～1.8μm。

进一步的，步骤b中，色谱柱为为C18烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱。

进一步的，步骤b中，用甲醇和0.2%甲酸水溶液两种流动相作为洗脱剂，其体积比为1:9。

进一步的，步骤b中，检测器为二极管阵列或紫外检测器，检测波长范围在230～320nm。