[发明专利]一种通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法

说明书

本申请公开了通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法，包括以下步骤：步骤①、设计特异性引物，进行5’同源臂、3’同源臂和人血清白蛋白基因的扩增；步骤②、通过载体构建同源臂与人血清白蛋白基因融合，然后将融合基因连接到基因打靶载体上；步骤③、再将3’同源臂连接到基因打靶载体上，即得表达人血清白蛋白的靶向载体；构建的表达人血清白蛋白的靶向载体包含有人血清白蛋白基因，以及进行同源重组的两个同源序列。本发明的抗衰方法，进一步扩展了血清白蛋白方面的研究；此外，通过采用本申请的方法能够大大提升表达效率；而通过采用本申请的血清白蛋白制备方法，能够大大提升操作的稳定性，避免机体紊乱的问题。

技术领域

本申请涉及生物基因领域，具体涉及一种通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法。

背景技术

白蛋白(albumin，又称清蛋白)是人体血浆中最主要的蛋白质，维持机体营养与渗透压。浓度达38～48g/L，约占血浆总蛋白的50％。肝脏每天约合成12-20g的白蛋白。清蛋白以前清蛋白的形式合成，成熟的清蛋白是含585个氨基酸残基的单一多肽链，分子形状呈椭圆形。球蛋白的浓度为15～30g/L。白蛋白/球蛋白(A/G)在临床上具有重要的意义。A/G的正常值是1.5～2.5：1。A/G增加可能是营养过剩疾病引起的白蛋白升高，或免疫球蛋白(抗体)的缺乏。A/G降低可能是由于白蛋白的减少：①合成能力的降低，②血管外渗出的增加，肾硬变，蛋白质渗出性胃肠炎症，肝硬化，灼伤，恶性肿瘤等；或是由于球蛋白的增加：①感染性疾病引起的抗体增加，②骨髓肿瘤引起的异常蛋白质的增加。血清白蛋白的下降及A/G的下降，对反映肝硬化时的肝功能程度具有重要的临床意义。

但是目前利用血清白蛋白做抗衰方面的研究并不多，尤其通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法。

发明内容

本申请的主要目的在于提供一种通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法，在扩展血清白蛋白研究的同时，大大提升表达效率，避免机体紊乱的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法，包括以下步骤：

步骤①、设计特异性引物，进行5’同源臂、3’同源臂和人血清白蛋白基因的扩增；

步骤②、通过载体构建同源臂与人血清白蛋白基因融合，然后将融合基因连接到基因打靶载体上；

步骤③、再将3’同源臂连接到基因打靶载体上，即得表达人血清白蛋白的靶向载体；构建的表达人血清白蛋白的靶向载体包含有人血清白蛋白基因，以及进行同源重组的两个同源序列。

进一步的，所述基因打靶载体为EGFP-ROSA-26基因打靶载体。

进一步的，步骤②中所述通过载体构建同源臂与人血清白蛋白基因融合的方法包括先将5’同源臂重组到载体上，再将人血清白蛋白基因重组到载体上，利用特异性引物将5’同源臂与人血清白蛋白基因的融合基因克隆下来。

进一步的，所述通过重组血清白蛋白促发靶向设计人体微生物组mRNA的抗衰方法，血清白蛋白的获取方法包括以下步骤：

步骤一、构建基因表达盒子，采用标准基因处理方法将其放入pPIC9基因媒介体中，得到一种由酵母菌表达人体血清白蛋白的基因组合质粒，备用；

步骤二、利用酵母菌和步骤一获得的基因组合质粒通过发酵法制备人体血清白蛋白溶液；

步骤三、将步骤二制备的人体血清白蛋白发酵溶液，用过滤、正离子交换液相色谱、沉淀提纯，制备所述的人体血清白蛋白。

进一步的，所述基因表达盒子包括启动基因、分泌信号基因、人体血清白蛋白编码基因、基因转录终止基因。